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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 伊紅染色液
貨號(hào) | FS-X9779 |
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中文名稱:伊紅染色液
英文名稱:Eosin Staining Solution
產(chǎn)品規(guī)格:100ml
貨號(hào):FS-X9779
產(chǎn)品介紹:
本染色液操作簡(jiǎn)單,不使用汞、甲醇等有毒試劑,可以用于組織切片或培養(yǎng)細(xì)胞的染色。本伊紅染色液染色后細(xì)胞漿呈粉紅色或紅色。本染色液可以和免疫熒光染色或免疫組化染色配合使用。一方面可以在本伊紅染色液染色后進(jìn)行免疫熒光染色或其它染料的染色,另一方面也可以在免疫組化染色后再進(jìn)行伊紅復(fù)染。本染色液可以重復(fù)使用,直至認(rèn)為效果不佳時(shí)再換用新的染色液。一個(gè)包裝的本染色液至少可以染色200個(gè)樣品。 注意事項(xiàng): 1. 需自備4%多聚、70%乙醇和95%乙醇。如果需要脫水、透明和封片處理,還需自備二甲苯,中性樹膠或其它封片劑。如果樣品是石蠟切片,需自備90%乙醇,無水乙醇以及二甲苯。 2. 染色液可以重復(fù)使用多次,認(rèn)為效果不佳時(shí)再更換新的染色液。 3. 第一次使用本試劑盒時(shí)建議先取1-2個(gè)樣品做預(yù)實(shí)驗(yàn)。 儲(chǔ)存條件:室溫,有效期一年。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
ⅩⅢ(F13)英文名:F13 囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子抗體包裝250mg
Ⅹ(F10)英文名:F10 酪蛋白激2相互作用蛋白1抗體包裝1g
子Ⅸ(F9)英文名:F9 CD40L抗體包裝25g
Ⅷ(F8)英文名:F8 α-s1酪蛋白抗體包裝5g
Ⅶ(F7)英文名:F7 CIDEB抗體包裝5ml
Ⅴ(F5)英文名:F5 高密度脂蛋白受體/清道夫受體抗體包裝25g
Ⅱ(F2)英文名:F2 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基7A抗體包裝5g
凝血/抗凝血復(fù)合體(TAT)英文名:TAT 凋亡抑制因子抗體包裝1g
凝溶膠蛋白(GS)英文名:GS D型產(chǎn)氣莢膜梭菌抗體包裝5g
凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX1)英文名:LOX1 降鈣抗體包裝1g
鎳紋蛋白(METRN)英文名:METRN 20號(hào)染色體開放閱讀框14抗體包裝250mg
尿調(diào)蛋白(UMOD)英文名:UMOD 結(jié)締組織生長(zhǎng)因子抗體包裝25g
尿皮質(zhì)3(UCN3)英文名:UCN3 性T抗原-4抗體包裝1g
尿皮質(zhì)2(UCN2)英文名:UCN2 降鈣受體抗體包裝5g
尿皮質(zhì)1(UCN1)英文名:UCN1 1號(hào)染色體開放閱讀框38抗體包裝100mg
副球菌Paracoccus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:純度>97%腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ試劑盒植;Phytic acid
泊庫島食烷菌Alcanivorax│borkumensis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品腫瘤壞死因子超家族15試劑盒q;fraxinellone
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:UV≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品腫瘤壞死因子γ試劑盒芝麻酚;Sesamol
伊紅染色液枯草芽孢桿 4,4'-雙(4-氨基苯氧基)二苯砜胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3
黑曲霉3.3928 氧化鈷(III)胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4
米根霉 3-苯乙胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-6
馬杜拉放線 2-甲氧基苯氧基乙乙酯胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-7
總狀共頭霉 苯甲氧羰基-DL-色胰島樣因子5
釀酒酵母 烯草酮胰島原
多根硬皮馬勃 溴甲氧胰淀
釀酒酵母 (R)-N-芴甲氧羰基-3-氨基-3-苯基-1-胰高血糖
大葉胡枝子腐朽病 2-溴苯并噻唑-6-羧乙酯胰高血糖樣肽1
銅綠假單胞(綠膿桿) 3-氧代環(huán)丁基芐酯胰高血糖樣肽1.7-36
大豆慢生根瘤 4-氨甲基四氫吡喃胰高血糖樣肽2
豬瘟病間接抗體 5-溴-1,3-二氟-2-芐氧基苯胰羧肽B2
多粘類芽胞桿 2--3-溴-5-胰腺癌標(biāo)志物-CA242
嗜芽孢桿 5-氨基-2-溴-3-吡啶胰腺衍生因子
白色茶樹菇 2-羥基異丁酰胰脂肪
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