甲基綠-派洛寧染色液(MGP染色液)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9769

英文名稱：Methyl Green-Pyronin Staining Solution

產品規(guī)格：100ml

貨號：FS-X9769

產品介紹:

本染色液是一種組織或細胞染色時常用的可以把細胞核染成綠色或藍綠色，把細胞漿和細胞核中的核仁染成紅色的染色液。甲基綠可以和細胞核中的DNA結合，從而產生細胞核染色；而派洛寧可以和細胞漿或核仁中的RNA結合，從而可以使細胞漿和核仁被染色。改進了染色液配制方法，不含很多甲基綠-派洛寧染色液中使用的劇毒甲醇。本染色液可以和免疫熒光染色或免疫組化染色配合使用。一方面可以在本甲基綠-派洛寧染色液染色后進行免疫熒光染色或其它染料的染色，另一方面也可以在免疫組化染色后再進行甲基綠-派洛寧復染。一個包裝的本染色液至少可以染色200個樣品。

注意事項：

1. 需自備4%多聚、70%乙醇和95%乙醇。如果需要脫水、透明和封片處理，還需自備二甲苯，中性樹膠或其它封片劑。如果樣品是石蠟切片，需自備90%乙醇，無水乙醇以及二甲苯。

2第一次使用本試劑盒時建議先取1-2個樣品做預實驗。

儲存條件：室溫避光，有效期一年。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

死亡關聯蛋白激3(DAPK3)英文名：DAPK3 電壓依賴性鈣通道CACNA1G+CACNA1H抗體包裝5MG

死亡關聯蛋白激1(DAPK1)英文名：DAPK1 鈣結合蛋白1抗體包裝1g

斯鈣1(STC1)英文名：STC1 神經型一氧化氮合成結合蛋白抗體包裝25g

絲切蛋白1(CFL1)英文名：CFL1 蕈堿型乙酰受體M4抗體包裝5g

絲裂原激活蛋白激激激激5(MAP4K5)英文名：MAP4K5 鈣/鈣調依賴蛋白激2α抗體包裝25g

絲聚蛋白(FLG)英文名：FLG 周期蛋白結合蛋白抗體包裝5g

絲棕櫚酰轉移長鏈堿性亞基1(SPTLC1)英文名：SPTLC1 分裂周期蛋白2抗體包裝10MG

絲蛋白1(PRSS1)英文名：PRSS1 分裂周期調控蛋白45抗體包裝5mg

雙調蛋白(AREG)英文名：AREG 染色體相關蛋白H抗體包裝1g

雙特異性磷5(DUSP5)英文名：DUSP5 中心體蛋白質76抗體包裝5g

雙特異性磷1(DUSP1)英文名：DUSP1 中心體蛋白152抗體包裝2g

雙特異性酪磷化調節(jié)激1A(DYRK1A)英文名：DYRK1A 酪蛋白激1γ2/casein kinase Iγ1抗體包裝500mg

雙糖鏈蛋白聚糖(BGN)英文名：BGN 唇裂和腭裂相關跨膜蛋白1抗體包裝1g

雙腎上腺皮質激樣激1(DCLK1)英文名：DCLK1 趨化樣因子超家族成員8抗體包裝250mg

雙腎上腺皮質激(DCX)英文名：DCX 趨化樣因子超家族成員1抗體包裝1g

耶納農球菌Agrococcus│jenensis 質量規(guī)格：>500U/mg,BR自然抗性相關巨噬蛋白1試劑盒竹紅菌;hypocrellin A

節(jié)桿菌Arthrobacter│sp. 質量規(guī)格：含量測定轉鐵蛋白受體試劑盒紫萁;Osmundacetone

蛹蟲草Cordyceps│militaris 質量規(guī)格：純度>99%,BR轉錄中介因子1-β試劑盒藏紅花;Potassium 7-Hyd
甲基綠-派洛寧染色液(MGP染色液)副干酪乳桿氨基磺鈉?；囸I

Bacillus aryabhattai N-苯甲?；?L-精線粒體呼吸鏈復合物

白鱗馬勃 4-乙基苯磺酰線粒體呼吸鏈復合物III

抗生鏈霉 N-三苯甲基咪唑線粒體呼吸鏈復合物IV

燕麥鐮孢四氟硝酰陽離子線粒體融合2

木賊鐮孢 N-Cbz-4-甲甲酯腺三磷結合盒轉運體G1

空氣近藤氏酵母 4-羥基-6-三氟甲基嘧啶腺三磷結合盒轉運體G2

玫瑰黃鏈霉三化釕三水合物腺環(huán)化

運動節(jié)桿 4-溴-2-苯甲腺環(huán)化1

靈芝 N-(2-氨基乙基)-4-嗎啉甲酰草鹽腺環(huán)化3

厭鹽假諾卡氏 2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺酰腺脫氨

大腸埃希 1,2,4,5-四溴消退D1

異常畢赤酵母 2-(7-甲氧基萘-1-基)乙消退E1

蘇云金芽孢桿松球亞種 1,3二甲基戊鹽鹽消退E2

大腸埃希氏 1,3-苯并惡唑-6-羧心肌肌鈣蛋白Ⅰ

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