當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞組織染色>> 細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒
貨號 | FS-X9771 |
---|
產(chǎn)品介紹:
本試劑盒是一種基于衰老時SA-β-Gal(senescence-associated β-galactosidase)活性水平上調(diào)而對衰老細胞或組織進行染色檢測的試劑盒。在普通的光學顯微鏡下就可以觀測到細胞或組織的衰老情況。本試劑盒可以用于培養(yǎng)細胞的衰老檢測,也可以用于組織切片的衰老檢測。 試劑盒組份: β-半乳糖苷酶染色固定液—————100ml X-Gal溶液————————————5ml β-半乳糖苷酶染色液A——————1ml β-半乳糖苷酶染色液B——————1ml β-半乳糖苷酶染色液C——————100ml 絕大多數(shù)正常細胞被認為僅有有限的分裂能力,在不能分裂后就進入衰老(senescence)狀態(tài)。此時細胞仍然是存活的,但細胞的基因和蛋白的表達譜發(fā)生了很大改變。衰老(senescence)的細胞不能在一些常規(guī)的刺激下再誘導細胞分裂,并且衰老細胞的細胞周期分布也比較特殊,不同于一些損傷誘導的細胞休眠,也不同于細胞生長接觸抑制的情況。衰老細胞細胞通常體積變大,表達pH 6.0時有高酶活性的β-半乳糖苷酶。細胞衰老也被認為是生物體抑制腫瘤的一種方式,同時也是生物體老化(aging)的一種潛在原因。 本細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒,以X-Gal為底物,在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會生成深藍色產(chǎn)物。從而在光學顯微鏡下很容易觀察到變成藍色的表達β-半乳糖苷酶的細胞或組織。 |
中文名稱:細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒
英文名稱:Senescence β-Galactosidase Staining Kit
產(chǎn)品規(guī)格:>100次
貨號:FS-X9771
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
生長分化因子11(GDF11)英文名:GDF11 胞尿鳥結(jié)合蛋白1抗體包裝1g
生長分化因子1(GDF1)英文名:GDF1 原腸胚雙向形成相關(guān)蛋白抗體包裝5g
滲透性糖蛋白(Pgp)英文名:Pgp 分裂周期蛋白CDC123抗體包裝100g
腎足蛋白(NPHN)英文名:NPHN 神經(jīng)蠟樣質(zhì)脂褐質(zhì)沉積病蛋白CLN3抗體包裝25g
腎臟腦蛋白(KIBRA)英文名:KIBRA 趨化樣因子超家族成員3抗體包裝100ml
腎損傷分子1(Kim1)英文名:Kim1 染色質(zhì)修飾蛋白1B抗體包裝25ml
腎(REN)英文名:REN 冷誘導RNA結(jié)合蛋白抗體包裝5ml
腎上腺能受體β3(ADRβ3)英文名:ADRβ3 連接相關(guān)蛋白1抗體包裝25g
腎上腺能受體β2(ADRβ2)英文名:ADRβ2 連接相關(guān)蛋白2抗體包裝5g
腎上腺能受體β1(ADRβ1)英文名:ADRβ1 磷化周期依賴性激5抗體包裝250mg
腎上腺能受體α1A(ADRα1A)英文名:ADRα1A 異戊烯半胱羧基轉(zhuǎn)移抗體包裝1g
神經(jīng)源3(NEUROG3)英文名:NEUROG3 核交換因子CLLD7抗體包裝5g
神經(jīng)元正五聚蛋白Ⅰ(NPTX1)英文名:NPTX1 趨化樣因子超家族成員4抗體包裝25g
神經(jīng)元特異性烯化(NSE)英文名:NSE 趨化樣因子超家族成員7抗體包裝5g
神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT4)英文名:NT4 趨化樣因子超家族成員5抗體包裝5g
蛹假交替單胞菌Pseudoalteromonas│undina 質(zhì)量規(guī)格:純度98%轉(zhuǎn)錄因子E2F1 紫莖女貞B(tài);Ligupurpurosi
玫瑰色庫克菌Kocuria│roseus 質(zhì)量規(guī)格:純度大于98%,USPgrade轉(zhuǎn)錄因子AP-1 紫莖女貞A ;Ligupurpuros
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:含量測定,HPLC>99%,標準品轉(zhuǎn)化生長因子-β誘導蛋白IG-H3試劑盒左旋肉堿; L(-)-Carnitine
細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒梭 5-甲基喹喔林信號3A
腦膜膿性金黃桿 偏鎂信號4A
異常漢遜酵母異常變種 甘鋁性別決定區(qū)Y框蛋白2
鏈格孢 蘋果?;?/span> 5-甲基-2-噻吩甲性結(jié)合球蛋白
釀酒酵母 四羥基二烷胸合成
橙色標樁 磷三(1,3-二異基)酯胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子
平菇 L-3-苯基乳甲酯胸腺嘧啶核磷化
大腸埃希氏 2-甲巰基苯并噁唑胸腺β4
雙孢蘑菇 3-溴-4-胸腺β4樣蛋白3
紙葡萄穗霉 2-溴-5-α1
乳乳球乳亞種 3,5-二吡啶-4-甲雄烯二酮
芽孢桿屬 1,1-環(huán)基亞磺酯嗅質(zhì)蛋白4
雙通道計時定時器 2-乙基己鋅, Zn, contains 1% diethylene glycol monomet溴脫氧核
Pseudomonas taiwanensis 1,5-二甲基-2-硝基亞氨基六氫-1,3,5-三血管活性腸肽
友好戈登氏 二乙基已鈣血管緊張1-7
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實性、準確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負責,儀表網(wǎng)對此不承擔任何保證責任。
溫馨提示:為規(guī)避購買風險,建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。