改良Van Gieson染色液-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9968

產(chǎn)品介紹:

用途：

膠原纖維染色，膠原纖維和肌纖維的鑒別染色

注意事項：

膠原纖維呈鮮紅色，肌纖維、胞質(zhì)、紅細胞呈黃色，胞核呈藍褐色。采用天青石藍B和Mayer液等改良配方，染色穩(wěn)定，保存時間長。

儲存條件：4℃，避光，12個月

中文名稱：改良Van Gieson染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：4×50ml

貨號：FS-X9968

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

大豆慢生根瘤菌末端補體復(fù)合物抗體Human CCNL1 山羊白介1β(IL-1β)免疫試劑盒

多殺性巴氏桿菌8號染色體開放閱讀框55抗體Human CD209 山羊白介1α(IL-1α)免疫試劑盒

粗柄羊肚菌補體C4a+C4b蛋白抗體Human Cathepsin H 山羊白介18(IL-18)免疫試劑盒

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變灰鏈霉菌CD44V10抗體Human CCDC158 (Coiled-coil domain-containing protein 158) 山羊白介10(IL-10)免疫試劑盒

秀珍菇CD44V4抗體Human BTN3A1 (Butyrophilin Subfamily 3 Member A1) 山羊阿黑皮原(POMC)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌緊密連接蛋白4抗體Human BBX(HMG box transcription factor BBX) 山羊γ干擾(IFN-γ)免疫試劑盒

盔形畢赤酵母6號染色體開放閱讀框140抗體Human BTNL2(Butyrophilin-like protein 2) 山羊β-脂蛋白(β-LP)免疫試劑盒

金橫裂鏈霉菌L型鈣通道蛋白抗體Human B1 山羊β內(nèi)啡肽(β-EP)免疫試劑盒

乳明串珠菌電壓依賴性鈣通道Cav3.1抗體Human BTNL8 ( Butyrophilin-like protein 8) 山羊α1性糖蛋白(α1-AGP)免疫試劑盒

熱帶假絲酵母緊密連接蛋白3抗體Human BubR1 (MAD3/BUB1-related protein kinase) 山羊toll樣受體2(TLR2)免疫試劑盒

露濕粘座孢霉（或露濕漆斑菌）磷化原癌基因c-Jun抗體Human BCAT1/ECA39 山羊M型肌激(CKM)免疫試劑盒

殼囊孢屬磷化原癌基因c-Jun抗體Human BCL2L10 山羊C型鈉尿肽(CNP)免疫試劑盒

穗狀平臍蠕孢1號染色體開放閱讀框86抗體Human BCL6(B-cell lymphoma 6 protein) 山羊C反應(yīng)蛋白(CRP)免疫試劑盒

芽胞桿菌8號染色體開放閱讀框59抗體Human BRD9 (Bromodomain-containing protein 9) 山羊CD14分子(CDl4)免疫試劑盒

紫色直絲鏈霉菌磷化補體成分5受體1抗體Human C14orf28 (Dopamine receptor-interacting protein 1) 山羊Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)免疫試劑盒

鴨瘟立默氏菌Riemerella│anatipestifer 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRP2蛋白抗體試劑盒苦龍膽酯

芽孢桿菌屬菌種Bacillus│T. 質(zhì)量規(guī)格：>98%，植物激級P27蛋白試劑盒康普瑞汀磷二鈉

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：BRP0蛋白抗體試劑盒康普瑞汀
改良Van Gieson染色液木樨草青霉 2-溴-3-氟-4-胰島樣生長因子結(jié)合蛋白5

果生鏈核盤乙縮乙二

蟲花棒束孢 2-乙基-3-甲氧基吡CD39分子

大豆慢生根瘤 2-萘頻哪酯聚(ADP核糖)聚合1

白色念珠-質(zhì)控 6-硝基喹喔啉-2-酮S100-β蛋白

羅氏鏈霉丁基萘磺鈉磷化TAR DNA結(jié)合蛋白43

Bacillus anthracis 六溴環(huán)十二烷多配體蛋白聚糖1

枯草芽孢桿 4,4,4-三氟巴豆乙酯酪激1

短桿屬甲基六氫苯酐Toll樣受體5

球孢白僵 L-天冬酰叔丁酯鞭毛蛋白

淡天藍鏈霉 1-Boc-3-氮雜環(huán)丁烷酮激

異常畢赤酵母 2--3-溴-5-氟吡啶CD247分子

大豆慢生根瘤 N-甲基正戊血小板P2Y12受體

溶桿 2,4-二甲基-5-基-1H-吡咯-3-羧b型鏈球抗m蛋白抗體

龜裂鏈霉 2-己基癸糖原合成激3

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