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貨號 | FS-X10081 |
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中文名稱:蘇丹Ⅳ染色液-A液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100ml
貨號:FS-X10081
產(chǎn)品介紹:
用途: 脂肪染色,主要用于顯示組織器官的脂肪變性和類脂質(zhì)的異常沉著。 注意事項: 主要由蘇丹四號、乙醇等組成。 儲存條件:室溫,避光,12個月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
Litorilituus sediminis胞漿動力蛋白中間鏈2抗體Human IRF3(Interferon regulatory factor 3) 人蛋-R-亞砜還原 B2,線粒體(MSRB2/CBS-1/MSRB/CGI-131)免疫試劑盒
土芽胞桿菌抑癌蛋白DKK3抗體Human GUCY2C(Heat-stable enterotoxin receptor) 人彈性蛋白2,中性粒(ELA2)免疫試劑盒
曲霉單克抗體Human BPIFA2(BPI fold-containing family A member 2) 人彈性蛋白(Elastase)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌腫瘤壞死因子配體超家族成員10CHuman MST1P9(Putative macrophage-stimulating protein MSTP9) 人彈性蛋白(ELN)免疫試劑盒
多粘類芽孢桿菌干擾誘導(dǎo)蛋白p58ipk抗體Human UTS2D(Urotensin-2B) 人膽(Cholic acid)免疫試劑盒
圍小叢殼轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子DACH2抗體Human HIST1H4A(Histone H4) 人膽囊收縮/縮膽囊八肽(CCK-8)免疫試劑盒
牡丹枝孢(牡丹葉霉病菌)穿膜蛋白DLK1抗體Human S100A7(Protein S100-A7) 人膽囊收縮/腸促胰肽(CCK)免疫試劑盒
紅酵母屬Dysferlin蛋白抗體Human CELA1(Chymotrypsin-like elastase family member 1) 人轉(zhuǎn)運體樣蛋白4(SLC44A4)免疫試劑盒
加拿大色鹽桿菌防御β2/Defensin β2抗體Human CALR(Calreticulin) 人乙酰轉(zhuǎn)移(ChAT)免疫試劑盒
小鏈霉菌死亡相關(guān)蛋白5抗體Human TRUB1(Probable tRNA pseudouridine synthase 1) 人膽紅氧化代謝物 免疫試劑盒
赭色擲孢酵母解旋DEAD5抗體Human PTEN(Phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate 3-phosphatase and dual-specificity protein phosphatase PTEN) 人膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)免疫試劑盒
大腸桿菌屬間粘附分子非整合蛋白3抗體Human SULT1A1(Sulfotransferase 1A1) 人膽固7α-羥化(CYP7A)免疫試劑盒
釀酒酵母Caspase 激活的脫氧核糖核抗體Human NDP(Norrin) 人膽固(CH)免疫試劑盒
木糖氧化無色桿菌死亡效應(yīng)結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體Human QDPR(Dihydropteridine reductase) 人單絲蛋白激1(LIMK1)免疫試劑盒
栗疫菌死亡效應(yīng)結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體Human HMGA1(High mobility group protein HMG-I/HMG-Y) 人單核趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)免疫試劑盒
*瓜果腐霉菌DNA聚合β抗體Human MMP19(Matrix metalloproteinase-19) 人單核趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)免疫試劑盒
惡臭假單胞菌Pseudomonas│putida 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5% (GC)苔黑龍膽二糖
蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC)反式茴香腦
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品法卡林二
蘇丹Ⅳ染色液-A液稻梨孢 香蘭基丁羽狀斑駁病
赤霉 Raloxifene HCl輕型黃邊病
核黃德沃斯氏 鹽喹那普利烯酰-CoA水合
豇豆慢生根瘤 Fmoc-L-4-苯淀粉
蘇云金芽孢桿 2-氨基-6-溴NAD-蘋果
土壤伯克氏 1-O-癸基-β-D-麥芽糖NADP-蘋果
黑曲霉 3--5-甲氧基碳酐β
亮白曲霉 3-甲基氨基轉(zhuǎn)移
黃曲霉 4-(2-三氟氧基)天門冬氨基轉(zhuǎn)移
黃色毛霉 (R,R)-(+)-雙(α-甲芐基)鹽鹽L(+)-3-羥脂酰脫氫
小紅酵母 基環(huán)三氧烷NADP-依賴蘋果脫氫
香栓 2--5-(三氟甲基)苯甲脫鎂葉綠A
少根根霉原變種 糖精鈉 水合物7-羥基
芽孢桿 7,7-二二環(huán)[4.1.0]庚烷
枯草芽孢桿 3-溴4-苯蘋果脫氫
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