Weigert彈力纖維染色液-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X9970

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：Weigert彈力纖維染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：3×50ml

貨號：FS-X9970

產(chǎn)品介紹:

用途：

彈力纖維染色

注意事項(xiàng)：

又Weigert樹脂酚復(fù)紅染色液，主要顯示成熟的彈力纖維。主要由堿性品紅、VG等組成。

儲(chǔ)存條件：4℃，避光，12個(gè)月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

根瘤菌19號染色體開放閱讀框42抗體Human ATG4B 人組織蛋白C(CTSC)免疫試劑盒

膠凍樣芽胞桿菌19號染色體開放閱讀框44抗體Human ATG7(Autophagy-related protein 7) 人組織蛋白B(CTSB)免疫試劑盒

釀酒酵母19號染色體開放閱讀框48抗體Human BBS8 人組蛋白乙?；?HAT)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌19號染色體開放閱讀框50抗體Human ATPB(ATP synthase subunit beta) 人組蛋白脫乙酰化2(HDAC2)免疫試劑盒

長枝木霉19號染色體開放閱讀框51抗體Human ATIC 人組蛋白去乙?；?(HDAC3)免疫試劑盒

硬水黃桿菌19號染色體開放閱讀框52抗體Human ARP2 人組蛋白去乙?；?HDAC)免疫試劑盒

Bacillus anthracis19號染色體開放閱讀框55抗體Human ATR 人組蛋白賴N-甲基轉(zhuǎn)移SETD7(SETD7)免疫試劑盒

巨獸芽孢桿菌19號染色體開放閱讀框56抗體Human ATG4B 人組蛋白H3.3(H3F3A/H3.3A/H3F3/PP781H3F3B/H3.3B)免疫試劑盒

四川散斑殼19號染色體開放閱讀框57抗體Human BBS8 人組蛋白H2b(histon-H2b)免疫試劑盒

玉蕈離褶傘19號染色體開放閱讀框61抗體Human ATG7(Autophagy-related protein 7) 人組(HIS)免疫試劑盒

黑曲霉19號染色體開放閱讀框77抗體Human ATIC 人足標(biāo)記蛋白/足盂蛋白(PCX)免疫試劑盒

產(chǎn)棒桿菌核DNA結(jié)合蛋白C1D抗體Human ATPB(ATP synthase subunit beta) 人總蛋白S(TPS)免疫試劑盒

奧氏蜜環(huán)菌1號染色體開放閱讀框58抗體Human ARP2 人總蛋白C(TPC)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌21號染色體開放閱讀框66抗體Human AXL(Tyrosine-protein kinase receptor UFO) 人自然抗性相關(guān)巨噬蛋白2(NRAMP-2)免疫試劑盒

嗜低鹽適鹽菌CDC42效應(yīng)蛋白3抗體Human ATR 人自然抗性相關(guān)巨噬蛋白1(NRAMP-1)免疫試劑盒

異常漢遜酵母異常變種7號染色體開放閱讀框43抗體Human ARP3 人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)免疫試劑盒

魯酵母Saccharomyces│rouxii 質(zhì)量規(guī)格：>98%，BRN-乙酰-β-D-基葡萄糖試劑盒柯諾辛

: Le-114,廣東微生物所46資源名稱: 香菇質(zhì)量規(guī)格：BRN-基-D-天冬受體試劑盒奎寧

樹狀假絲酵母Candida│arborea 質(zhì)量規(guī)格：BRN鈣黏蛋白/神經(jīng)鈣黏蛋白試劑盒苦馬豆
Weigert彈力纖維染色液Chromohalobacter 顏料黃1KL-7

宓花豆根瘤 2--5-溴甲酯抗M3D受體抗體

塔賓曲霉 4-甲基-5-甲基-1,3-惡唑熱休克蛋白27

傘枝犁頭霉鹽安他唑啉酪激

柱形矛束霉 7-羥基-5-甲基-1,3,4-三氮利磷化HER2蛋白

水生拉恩氏 2-溴-5--1,3-二氟苯膜聯(lián)蛋白ⅡIgG抗體

糞產(chǎn)堿桿 3--5-氟膜聯(lián)蛋白ⅡIgM抗體

科氏芽孢桿（可訂購）對苯乙酰Mac-2結(jié)合蛋白糖基化異構(gòu)體

樟疫霉蘆丁三水合物白喉抗體

鏈格孢烯己酯載脂運(yùn)載蛋白-2

冬蟲夏草（冬蟲夏草，蝙蝠蛾被毛孢，中國被毛孢） 4-氨基苯甲脒過氧化物1

三葉草根瘤 5-溴-2-氟腺病7型IgG抗體

棘孢小單孢 (E)-乙-2-己烯酯腺病7型IgM抗體

楊生盤二孢 3-溴-4-T白血病1+2型病

地衣芽孢桿 3-溴-4-甲酯ATP合成
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)