硫堇-橘紅G植物組織染色液-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10181

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：硫堇-橘紅G植物組織染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：2×50ml

貨號(hào)：FS-X10181

產(chǎn)品介紹:

用途：

主要由硫堇染色液、橘紅G染色液組成，木質(zhì)化組織被染成藍(lán)色，纖維細(xì)胞被染成黃綠色，細(xì)菌被染成藍(lán)色，可以用于Synchytrium、Peronospora、Phytophthora、Sclerotinia、Botrytis、Puccinia、Fusarium、Diplodia等真菌的染色

注意事項(xiàng)：

因材料種類、切片厚薄的不同，染色時(shí)間也不同。同時(shí)要注意酒精脫色的程度。

儲(chǔ)存條件：室溫，避光，12個(gè)月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

球孢白僵菌脊髓性肌癥蛋白Gemin4抗體Human PSMB9(Proteasome subunit beta type-9) 大鼠粘蛋白/粘液5B(MUC5B)免疫試劑盒

擬莖點(diǎn)霉脊髓性肌癥蛋白Gemin5抗體Human UQCRB 大鼠粘蛋白/粘液5AC(MUC5AC)免疫試劑盒

葡萄座腔菌脊髓性肌癥蛋白Gemin7抗體Human UQCRC2 大鼠粘蛋白/粘液1(MUC1)免疫試劑盒

硬水黃桿菌GTP結(jié)合絲裂原誘導(dǎo)T蛋白抗體Human URAT1 大鼠再生基因蛋白1a(REG-1a)免疫試劑盒

中國(guó)臺(tái)灣根霉染色體卷曲螺旋域包含蛋白1抗體Human UQCRFS1 大鼠載脂蛋白H(Apo-H)免疫試劑盒

熱帶假絲酵母脊髓性肌癥蛋白Gemin6抗體Human UQCRQ 大鼠載脂蛋白E(Apo-E)免疫試劑盒

蒼黃擬無(wú)枝菌磷化膠質(zhì)纖維性蛋白抗體Human URB2 大鼠載脂蛋白C-II(APOC2)ELISA

核果黑腐皮殼菌自主生長(zhǎng)因子GFI1抗體Human UQCRH 大鼠載脂蛋白C-I(APOC1)免疫試劑盒

自養(yǎng)假諾卡氏菌G蛋白偶聯(lián)受體109A抗體Human URB1 大鼠載脂蛋白B-48(ApoB48)免疫試劑盒

冷海水黃桿菌γ-銜接蛋白相關(guān)蛋白1抗體Human UPK1A 大鼠載脂蛋白B100(apo-B100)免疫試劑盒

野油菜黃單胞菌棲絨毛致病變種γ-銜接蛋白相關(guān)蛋白2抗體Human UPF3B 大鼠載脂蛋白A5(apo-A5)免疫試劑盒

紅酵母γ-銜接蛋白相關(guān)蛋白3抗體Human UPK2 大鼠載脂蛋白A1前體(Pre-Apo-A1)免疫試劑盒

釀酒酵母配子生成抗體Human URM1 大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)免疫試劑盒

半膠蘑菇(暫定名)γ谷酰轉(zhuǎn)肽2重鏈抗體Human UNC13D/Munc13-4 大鼠孕受體(PROGR)免疫試劑盒

拜耳接合酵母γ-谷酰轉(zhuǎn)肽5重鏈抗體Human UPK3B 大鼠孕激/孕(PROG)免疫試劑盒

Promicromonospora磷化GATA結(jié)合蛋白3抗體Human CXCR5(C-X-C chemokine receptor type 5) 大鼠鑰孔蟲戚血藍(lán)蛋白(KLH)抗體(IgG)免疫試劑盒

尖孢鐮孢Fusarium│oxysporum 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品28-去基-β-香樹脂

金針菇Flammulina│velutipes 質(zhì)量規(guī)格：Bentone SD-1,適于中至低性溶劑巖大戟內(nèi)酯B

棒束孢Isaria│sp. 質(zhì)量規(guī)格：Bentone SD-2,適于中高性溶劑野馬追內(nèi)酯B
硫堇-橘紅G植物組織染色液沙漠畢赤酵母 5-硝基骨特異性堿性磷B

粗柄白蘑 3--4-異氧基苯基骨成型蛋白

扣囊復(fù)膜孢酵母 3-芐氧基-1-過(guò)氧化氫

巴氏醋桿 7-甲氧基苯并呋喃-2-甲過(guò)氧化物體增殖物激活受體α

微球三蝶烯過(guò)氧化物體增殖物激活受體β

美澳型核果褐腐病 4-羥基-5-嘧啶甲甲酯過(guò)氧化物體增殖物激活受體γ

考克氏 4-氨基-3,5-二溴吡啶過(guò)氧化脂質(zhì);乳過(guò)氧化物

啤酒神金黃桿 2,6-二甲氧基吡還原型

卷枝毛霉灰藍(lán)變型醌茜隱色體核心蛋白聚糖

微枝形桿還原黃G核因子E2相關(guān)因子2

糙梗青霉 2,-1-甲叔丁酯核因子κB

淺白隱球酵母溴化1-丁基-2, 3-二甲基咪唑核因子κB受體活化因子配基

釀酒酵母 1,4-二酞褐黑

白藍(lán)放線 2-溴-9,9-二苯基芴黑色抗體

根瘤 N-甲基異黑皮質(zhì)受體4
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)