當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 維多利亞藍(lán)彈力纖維染色液
貨號(hào) | FS-X9973 |
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中文名稱:維多利亞藍(lán)彈力纖維染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:4×50ml
貨號(hào):FS-X9973
產(chǎn)品介紹:
用途: 彈力纖維染色,乙型肝炎表面抗原物質(zhì)染色 注意事項(xiàng): 彈力纖維呈藍(lán)色,胞核呈紅色 儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
栗疫菌1號(hào)染色體開放閱讀框105抗體Human AMIGO2 人腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)化(TACE)免疫試劑盒
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿菌Ⅰ型補(bǔ)體受體抗體(C3b/C4b受體抗體)Human AGR3 人腫瘤壞死因子α(TNF-α)抗體免疫試劑盒
芍藥枝孢霉菌趨化樣因子受體1抗體Human AGS3 人腫瘤壞死因子α(TNF-α)免疫試劑盒
釀酒酵母趨化樣因子受體1抗體Human AHSA1 人腫瘤關(guān)聯(lián)鈣信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子2(TACSTD2)免疫試劑盒
樹舌靈芝磷化β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接抗體Human AREG(Amphiregulin) 人中性內(nèi)肽/腦啡肽(NEP)免疫試劑盒
變異鏈霉菌磷化β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接抗體Human AMPK beta 2 趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)免疫試劑盒
空腸彎曲桿菌磷化β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接抗體Human AK3L1 顆??贵w(ANGA)免疫試劑盒
生活飲用水 鈣、鎂 磷化β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接抗體Human AMIGO2 抗體(ANA)免疫試劑盒
食物鹽單胞菌磷化β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接抗體Human AMPK gamma 1 防御3(DEFA3)免疫試劑盒
相思根瘤菌磷化β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接抗體Human AGR3 防御1-3(HNP1-3)免疫試劑盒
釀酒酵母βA3/A1-crystallin蛋白抗體Human AGS3 人中心體紡錘體相關(guān)蛋白1(CSPP1)免疫試劑盒
產(chǎn)黃青霉γS-crystallin蛋白抗體Human AREG(Amphiregulin) 人中心體蛋白350kDa(CEP350)免疫試劑盒
細(xì)鏈格孢(可訂購)1號(hào)染色體開放閱讀框85抗體Human AHSA1 人中華肝吸蟲(CS)抗體(IgG)免疫試劑盒
產(chǎn)二鏈霉菌1號(hào)染色體開放閱讀框87抗體Human AK3L1 人制瘤M受體(OSMR)免疫試劑盒
托木爾假單胞菌1號(hào)染色體開放閱讀框95抗體Human AMPK gamma 1 人酯酰甘油激ζ(DGKZ)免疫試劑盒
枯草芽胞桿菌補(bǔ)體C1S鏈多肽抗體Human AMPK beta 2 人脂氧A4(LXA4)免疫試劑盒
: CICC10293←ATCC13048資源名稱: 產(chǎn)氣腸桿菌 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BRNa+/H+交換體3試劑盒堅(jiān)牢藍(lán)BB鹽
列文虎克菌(加詞待譯)Leeuwenhoekiella│aequorea 質(zhì)量規(guī)格:商品級(jí)N1,N12-二乙?;?8-氧基異歐前胡內(nèi)酯
紅細(xì)菌Rhodobacter│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRN試劑盒基麥冬黃烷B
維多利亞藍(lán)彈力纖維染色液解淀粉芽孢桿 正癸基神經(jīng)酰抗體
釀酒酵母 2,2'--(4-叔丁基-4-乙基)I型膠原C末端肽
施氏假單胞 正癸基溶血磷脂性磷
弗雷德里克斯堡假單胞 L-異亮烯酯對(duì)磺鹽白介17α
地下枝芽孢桿 1-芘白介17β
青霉屬 己酯白介17γ
雙倒卵形紅冬孢酵母 2-溴丁叔丁酯組蛋白去甲基化
葡萄座腔 2,4-二-6-磺腎上腺自身抗體
泡盛曲霉 (E)-4-硝基肉桂21羥化抗體
布氏乳桿 2--4-甲基-5-氟吡啶凝血
Methylobacterium 2--3-氟-4-分泌型卷曲相關(guān)蛋白2
產(chǎn)單核李氏桿 2,5-吡啶二羧二甲酯α酮戊二脫氫
香菇屬 鄰苯二甲?;钡仄紹抗原
白靈側(cè)耳 3-噻吩甲碳酐2
無花果曲霉 3-噻吩-2-羧甲酯環(huán)氧化2
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