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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 蘇丹Ⅲ染色液-C液
貨號(hào) | FS-X10083 |
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產(chǎn)品介紹:
用途: 中性脂肪染色,主要用于顯示組織器官的脂肪變性和類脂質(zhì)的異常沉著。 注意事項(xiàng): 主要由蘇丹三、乙醇等組成,染色后脂肪呈橘紅色,細(xì)胞核呈淡藍(lán)色。 儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月 |
中文名稱:蘇丹Ⅲ染色液-C液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100ml
貨號(hào):FS-X10083
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
黑曲霉DENND2A蛋白抗體Human BDG(beta-D-glucan) 人存活抗體/生存蛋白(Surv)免疫試劑盒
海洋沉積物芽孢桿菌DENND1B蛋白抗體Human CPM(Carboxypeptidase M) 人脆性組三聯(lián)體(FHIT)免疫試劑盒
漢遜德巴利酵母漢遜變種DEPTOR蛋白抗體Human BTG3(Protein BTG3) 人催乳誘導(dǎo)蛋白(PIP)免疫試劑盒
匍枝根霉(黑根霉)耳聾常染色體顯性遺傳相關(guān)蛋白1抗體Human ACTN4(Alpha-actinin-4) 人催乳抑制激(PIH)免疫試劑盒
天門冬紫色鏈霉菌短鏈脫氫/還原家族9抗體Human NDUFA6(NADH dehydrogenase [ubiquinone] 1 alpha subcomplex subunit 6) 人催乳釋放激(PRH)免疫試劑盒
褐孢霉菌*短鏈脫氫還原13抗體Human LAMP2(Lysosome-associated membrane glycoprotein 2) 人催乳(PRL)免疫試劑盒
皺褶假絲酵母視網(wǎng)膜短鏈脫氫/還原家族7抗體Human ADAM28(Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 28) 人催產(chǎn)受體(OXTR)免疫試劑盒
芽孢桿菌屬短鏈脫氫/還原家族X抗體Human ARID4B(AT-rich interactive domain-containing protein 4B) 人催產(chǎn)(OT)免疫試劑盒
嗜熱脂肪地芽孢桿菌短鏈脫氫/還原家族4抗體Human COL27A1(Collagen alpha-1(XXVII) chain) 人促胰液/胰泌(Secretin)免疫試劑盒
大腸桿菌干擾腎癌蛋白2抗體Human COL9A3(Collagen alpha-3(IX) chain) 人促胰液/分泌受體(SR)免疫試劑盒
石蠟節(jié)桿菌DGCR2蛋白抗體Human CPM(Carboxypeptidase M) 人促性腺激釋放激(GnRH)免疫試劑盒
蜂房哈夫尼菌短鏈脫氫/還原家族7C抗體Human VNN1(Pantetheinase) 人促?;鞍?ASP)免疫試劑盒
釀酒酵母松果體N甲基乙酰羥色抗體Human MNX1(Motor neuron and pancreas homeobox protein 1) 人促胃液受體(GsaR)免疫試劑盒
卷曲乳桿菌*短鏈脫氫還原1抗體Human OTX2(Homeobox protein OTX2) 人促睡眠肽(DSIP)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌DNAJC7蛋白抗體Human NANOG(Homeobox protein NANOG) 人促生長(zhǎng)激釋放激(GHRH)免疫試劑盒
直立共養(yǎng)單胞菌動(dòng)力結(jié)合蛋白DNMBP抗體Human RNH1(Ribonuclease inhibitor) 人促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)免疫試劑盒
擬諾卡氏菌屬菌種Nocardiopsis│sp. 質(zhì)量規(guī)格:1.00mg/mL,基體:純D-生物/維生H
青霉屬Penicillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:0.96異澤蘭黃
: CBS404.87資源名稱: 大腸埃希氏菌 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品女貞
蘇丹Ⅲ染色液-C液灰肉色鏈霉 鉛原卟啉Ⅸ
桑帕約氏酵母 2--4-(三氟甲基)吡啶鎂原卟啉
屎腸球 草鍶原脫植基葉綠
蛹蟲草* 草亞錫乙烯利
鞘氨盒屬 試劑三磷腺
巨型艾美耳球蟲 N-二苯亞甲基-甘叔丁酯幾丁質(zhì)
葡萄座腔 3-噻吩-2-羧甲酯木聚糖
金龜子綠僵小孢變種 六正丁基二錫碳酐
栗疫 1,4,5,8-萘四甲酐碳酐6
魯杰氏 (4-)乙甲酯鹽鹽過氧化氫
大腸埃希氏 2,4-二氟脈帶花葉病
枯草芽孢桿 二環(huán)戊二烯環(huán)氧化物金屬硫蛋白
炭疽芽胞桿 雙(3,5,3′,5′-二甲氧基二亞芐基酮)鈀(0)絡(luò)合肽
棲藻海桿狀 乙基鋰二氫辣椒
芥黃蜜環(huán) 3-氨基磺鈉鹽辣椒
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