植物組織鐵染色液-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10183

產(chǎn)品介紹:

用途：

無需切片既可染色，從整體上顯示植物體內(nèi)鐵分布的植物體內(nèi)鐵元素染色。

注意事項(xiàng)：

因材料種類、切片厚薄的不同，染色時(shí)間也不同。

儲(chǔ)存條件：RT，避光，12個(gè)月

中文名稱：植物組織鐵染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：2×50ml

貨號(hào)：FS-X10183

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

屎腸球菌粒-巨噬集落激因子受體β抗體Human UHRF1 大鼠抑胃肽(GIP)免疫試劑盒

硬結(jié)節(jié)桿菌生長(zhǎng)停滯特異性蛋白8抗體Human UIMC1 大鼠抑瘤M受體(OSMR)免疫試劑盒

Massilia duraG蛋白偶聯(lián)受體GPR135蛋白抗體Human UIMC1 大鼠抑瘤M(OSM)免疫試劑盒

宇佐美曲霉磷脂酰基蛋白聚糖-5抗體Human UMPS 大鼠異檸檬脫氫(ICD)免疫試劑盒

中慢生華癸根瘤菌GADD45γ相互作用蛋白1抗體Human ULBP1 大鼠乙酰羧化合成(ACC)免疫試劑盒

島生坂野酵母GTP結(jié)合蛋白4抗體（慢性腎功能衰竭蛋白）Human UL27 大鼠乙酰免疫試劑盒

香菇磷化gamma基丁B型受體1抗體Human UNC119 大鼠乙酰酯(AChE)免疫試劑盒

假單胞菌磷化谷受體2抗體Human UNC13A/Munc13-1 大鼠乙酰受體抗體(AChRab)免疫試劑盒

膠孢磷化鳥調(diào)節(jié)蛋白12抗體Human UCHL3 大鼠乙酰(Ach)免疫試劑盒

金色毛殼珠蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體Human UBXN11 大鼠乙脫氫(ALDH)免疫試劑盒

Pseudomonas plecoglossicida 過氧化3Human UGT2B4 大鼠乙脫氫(ADH)免疫試劑盒

Xenorhabdus過氧化4抗體Human UGP2 大鼠胰脂肪(PL)免疫試劑盒

阿氏芽孢桿菌高爾基體膜蛋白GP73抗體Human CLDN2(Claudin-2) 大鼠胰高血糖樣肽2(Glp-2)免疫試劑盒

大腸桿菌G蛋白偶聯(lián)受體172B抗體Human UCHL5 大鼠胰高血糖樣肽1(Glp-1)免疫試劑盒

釀酒酵母生發(fā)中心B淋巴相關(guān)蛋白2抗體Human UCHL5IP 大鼠胰高血糖(GC)免疫試劑盒

非無菌藥品沙門菌（陽性）G蛋白轉(zhuǎn)錄因子α3抗體Human UGT2B7 大鼠胰多肽免疫試劑盒

假絲酵母Candida│sp. 質(zhì)量規(guī)格：電鍍脫色,200目,from wood萊苞迪甙C

: 175244資源名稱: 福氏志賀氏菌質(zhì)量規(guī)格：催化劑載體,8-16目羌活

鏈霉菌（灰褐類群）Streptomyces│caeruleatus 質(zhì)量規(guī)格：凈、氣體純化,棒,φ1.0mm胡蘿卜
植物組織鐵染色液乳乳球乳亞種 1-（二苯基）哌基質(zhì)金屬蛋白抑制因子1

葡萄座腔屬環(huán)乙酯基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2

大腸埃希 3,3'-二甲腺原基質(zhì)金屬蛋白抑制因子3

產(chǎn)氣列契瓦尼爾氏對(duì)氟苯甲基質(zhì)金屬蛋白抑制因子4

大腸埃希 6-氟-3-(4-基)-1,2-苯并異噁唑鹽鹽基質(zhì)衍生因子1

芬尼青霉 1-乙基-4-氟苯基質(zhì)衍生因子1α

云芝栓孔（變色栓） 2,3,4-三氟苯基質(zhì)相互作用分子1

枝孢屬 3-氟肉桂激活A(yù)

鏈霉 1-(4-甲氧基苯基)哌鹽鹽激活B

釀酒酵母 3-(3-氟苯基)低密度脂蛋白

宇佐美曲霉 3-氟-4-羥基幾丁質(zhì)3

有柄樹舌靈芝(白芝) 間氟苯乙?guī)锥≠|(zhì)3樣蛋白3

異常漢遜酵母 4,7-雙(5-溴-4-辛基噻吩-2-基) 苯并[c][1,2,5]噻二唑己糖激

葡萄座腔二喹啉己糖激2

枯草芽孢桿 1-(3-氨基)-4-甲基哌甲胎蛋白

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