PluronicF-127-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9789

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：1g

貨號：FS-X9789

產(chǎn)品介紹:

Pluronic F-127是一種非離子型表面活性劑，它具有100%的活性并且對細胞相對無毒性的，常與染料AM酯一起使用，以增強其水溶性。它在低溫下可溶，但是在室溫下成凝膠狀。

使用Pluronic? F-127 作為探針加載助溶劑由于某些AM 酯在水溶液中不溶解，低毒性的Pluronic? F-127 常常被用于促進細胞加載染料。這種非離子型的去污劑在在DMSO 中的終濃度可以達到20%（w/v）。有時在制備儲液時，也會用到Pluronic? F-127，40 度溫和加熱可以協(xié)助Pluronic? F-127 溶于DMSO，但Pluronic? F-127 可以降低AM 酯的穩(wěn)定性，所以，建議好僅在工作液中使用Pluronic? F-127。

備注：Pluronic? F-127 制備成20%的DMSO 儲液后，避光保存，有效期6 個月。

儲存：RT，有效期12個月。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

激活蛋白C(APC)英文名：APC 9號染色體開放閱讀框139抗體包裝1g

激活T-細胞核因子1(NFATC1)英文名：NFATC1 9號染色體開放閱讀框140抗體包裝5g

基質(zhì)細胞衍生因子4(SDF4)英文名：SDF4 9號染色體開放閱讀框142抗體包裝1g

基質(zhì)細胞衍生因子1(SDF1)英文名：SDF1 9號染色體開放閱讀框163抗體包裝5g

基質(zhì)金屬蛋白9(MMP9)英文名：MMP9 9號染色體開放閱讀框169抗體包裝25g

基質(zhì)金屬蛋白8(MMP8)英文名：MMP8 9號染色體開放閱讀框173抗體包裝5g

基質(zhì)金屬蛋白7(MMP7)英文名：MMP7 9號染色體開放閱讀框21抗體包裝100g

基質(zhì)金屬蛋白3(MMP3)英文名：MMP3 磷化絲/蘇蛋白激II β/casein kinase IIβ抗體包裝25g

基質(zhì)金屬蛋白23B(MMP23B)英文名：MMP23B 癌胚抗原抗體包裝100g

基質(zhì)金屬蛋白2(MMP2)英文名：MMP2 癌胚抗原抗體包裝25g

基質(zhì)金屬蛋白19(MMP19)英文名：MMP19 粘附分子相關(guān)蛋白/癌基因下調(diào)蛋白抗體包裝500g

基質(zhì)金屬蛋白15(MMP15)英文名：MMP15 淋巴抗原Ly6c抗體包裝25g

基質(zhì)金屬蛋白14(MMP14)英文名：MMP14 周期E抗體包裝5g

基質(zhì)金屬蛋白13(MMP13)英文名：MMP13 7號染色體開放閱讀框50抗體包裝25g

基質(zhì)金屬蛋白12(MMP12)英文名：MMP12 7號染色體開放閱讀框53抗體包裝5g

JCM3025=CBS429.61=DSM43023=IFM1175=IFO13資源名稱: 白色鏈孢囊菌質(zhì)量規(guī)格：>95%,EP,BR脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒銀杏雙黃;ginkgetin

雅致小克銀漢霉Cunninghamella│elegans 質(zhì)量規(guī)格：效價測定整合連接激1試劑盒楊芽黃;Tectochrysin

葡萄座腔菌屬Botryosphaeria│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP34整合β4結(jié)合蛋白試劑盒魚藤;deguelin
PluronicF-127玉蕈離褶傘 4-乙氧基-2,3-二氟苯軸突生長誘向因子1

黑曲霉 (二甲基氨基)乙鹽鹽侏儒相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2

產(chǎn)氨棒桿癸二二酰肼轉(zhuǎn)化生長因子α

奧氏蜜環(huán) 葡乳鈣轉(zhuǎn)化生長因子β

枯草芽孢桿 4--2-甲氧基-3-吡啶甲甲酯轉(zhuǎn)化生長因子β1

嗜低鹽適鹽 2-乙氧基-4-溴苯轉(zhuǎn)化生長因子β2

異常漢遜酵母異常變種 5-氨基-2,4-二氟甲酯轉(zhuǎn)化生長因子β3

閃光須霉 4-溴丁轉(zhuǎn)化生長因子-β誘導蛋白IG-H3

少根根霉東京變種乙異酯轉(zhuǎn)甲狀腺蛋白

黑曲霉鹽萬乃洛韋轉(zhuǎn)錄因子1

麥根腐平臍蠕孢沙坦轉(zhuǎn)錄因子E2F1

東方伊薩酵母 2-基-4,5-咪唑二羧二甲酯轉(zhuǎn)錄因子抗體-1

大豆慢生根瘤 1,2-二溴四氟乙烷轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)孤獨受體γt

毛相思根瘤 (4R-Cis)-6-羥甲基-2,2-二甲基-1,3-二氧六環(huán)-4-乙叔丁酯轉(zhuǎn)鐵蛋白

高山被孢霉 4-甲基-3-酮基-N-苯基戊酰轉(zhuǎn)鐵蛋白受體

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