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貨號 | FS-X9975 |
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產(chǎn)品介紹:
用途: 區(qū)分結(jié)締組織蛋白多糖中是否硫酸軟骨和透明質(zhì)酸 注意事項: 根據(jù)透明質(zhì)酸酶可以裂解透明質(zhì)酸和硫酸軟骨的糖苷鍵這一特性,同時聯(lián)合使用阿利新藍染色液,使上述物質(zhì)不著色,而未處理的呈亮藍色,該法需要做陽性對照。 儲存條件:4℃,避光,12個月 |
中文名稱:透明質(zhì)酸染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:2×50ml
貨號:FS-X9975
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
炭疽芽胞桿菌20號染色體開放閱讀框7抗體Human AlaRS 人整合α2(ITGA2)免疫試劑盒
解淀粉芽孢桿菌20號染色體開放閱讀框79抗體Human ADAMDEC1 人整合A5(ITGA5)免疫試劑盒
羊肚菌(不能訂購)20號染色體開放閱讀框94抗體Human ADH1C 人真胰島(TI)免疫試劑盒
釀酒酵母21號染色體開放閱讀框37抗體Human ACTL6A 人真核延伸因子2(eEF2)免疫試劑盒
清酒乳桿菌清酒亞種22號染色體開放閱讀框15抗體Human ADH4 人真核起始因子4A - II(EIF4A2/DDX2B/EIF4F)免疫試劑盒
鏈格孢屬22號染色體開放閱讀框13抗體Human ADH6 人張力蛋白4(TNS4)免疫試劑盒
糞生糞殼22號染色體開放閱讀框26抗體Human ADHFE1 人粘蛋白3(MUC3)免疫試劑盒
球毛殼菌補體C2b鏈多肽抗體Human ACOXL 人粘蛋白2(MUC2)免疫試劑盒
深褐芽孢桿菌2號染色體開放閱讀框16抗體Human ADI1 人增殖誘導(dǎo)配體(APRIL)免疫試劑盒
多主葡萄殼菌2號染色體開放閱讀框27抗體Human ACP1 人早期生長反應(yīng)因子1(EGR1)免疫試劑盒
Bacteroides sartorii 磷化δ連環(huán)蛋白抗體Human ADNP 人早期前列腺癌抗原2(EPCA2)免疫試劑盒
假單胞菌磷化δ連環(huán)蛋白抗體Human ACSM2A 人早期活化抗原CD69(CD69)免疫試劑盒
豬鏈球菌分型血清參考品 血清型 SS5磷化δ連環(huán)蛋白抗體Human AF-6 人早老2(PS-2)免疫試劑盒
假單胞菌屬磷化δ連環(huán)蛋白抗體Human ACSM3 人早老1(PS-1)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌磷化δ連環(huán)蛋白抗體Human AF9 人再生胰島衍生1α/胰石蛋白/胰線蛋白(REG1A)免疫試劑盒
蠟樣芽孢桿菌磷化δ連環(huán)蛋白抗體Human ACSM5 人載脂蛋白L1(APOL1)免疫試劑盒
黃傘Pholiota│adiposa (Fr.) Quel. 質(zhì)量規(guī)格:BRMAP磷雙特異性磷1試劑盒
核盤菌Sclerotinia│sclerotiorum (Lib.) de Bary 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRL選擇試劑盒基
黑脈羊肚菌Morchella│angusticeps 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRL-腎上腺巨豆三烯
透明質(zhì)酸染色液香蕉 1-丁基-3-甲基咪唑乳鹽β烯
鴨疫里氏桿 3-氟-4-甲甲酯抗甲狀腺抗體
嘴突凸臍蠕孢 三聚酯白介1可溶性受體
牛布氏陽性血清國家標(biāo)準(zhǔn)品(虎紅平板) (2S,6S)-2,6-二叔丁基-2,3,5,6-四氫-1H-咪唑并[1,2-a]咪唑百日咳IgG抗體
Rhizobium 4-甲磺?;诫蔓}鹽百日咳IgM抗體
塔氏糖多孢 2,6-二甲基喹啉T4多聚核激
銅綠假單胞 6-溴-2-甲基喹啉保羅樣激
大腸埃希 4-(4-溴吡唑-1-基)-1-甲叔丁酯尿泛-核糖體融合蛋白52
金黃殼囊孢 (S)-1-(2,6-二-3-氟苯基)乙淋球抗體
墳?zāi)构?jié)桿 2-羥基-3-甲氧基EB病衣殼抗原IgG抗體
枯草芽孢桿 5-羥基異喹啉EB病衣殼抗原IgM抗體
土曲霉 (2S,4R)-1-((S)-2-(環(huán)戊氧羰基))-3,3-二甲基丁?;?-4-羥基吡咯烷-2-羧EB病核抗原
燒土正青霉 2-(二氟甲氧基)苯甲基大腸桿宿主殘留蛋白
雞縱 4-正基T4多聚核激
蘋果錐梗孢 3--5-氮雜STEAP家族成員1
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