油紅O染色液(細(xì)胞涂片專用)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10085

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：油紅O染色液(細(xì)胞涂片專用)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：4×20ml|4×50ml

貨號(hào)：FS-X10085

產(chǎn)品介紹:

用途：

專門用于脂肪/脂滴染色

注意事項(xiàng)：

主要由油紅O異丙醇飽和液組成，染色后脂滴呈橘紅色。

儲(chǔ)存條件：4℃，12個(gè)月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

蠟狀芽孢桿菌D型多巴色脫羧Human STAB1(Stabilin-1) 人垂體腺環(huán)化激活肽(PACAP)免疫試劑盒

委內(nèi)瑞拉鏈霉菌DNA聚合α抗體Human AMELX(Amelogenin, X isoform) 人垂草扁桃(VMA)免疫試劑盒

麗齒菌屬MREG蛋白抗體Human RYR1(Ryanodine receptor 1) 人穿孔/成孔蛋白(PRF1/PFP)免疫試劑盒

鹽古桿菌RAS相關(guān)抑生長蛋白1抗體Human SFRP5(Secreted frizzled-related protein 5) 人程序性死亡因子4(PDCD4)免疫試劑盒

分枝節(jié)桿菌MAP激激活死亡域蛋白2C抗體Human CA14(Carbonic anhydrase 14) 人程序性死亡因子配體1(PD-L1/CD274)免疫試劑盒

匍枝根霉(黑根霉)甲狀腺5'脫3抗體Human RAP1GDS1(Rap1 GTPase-GDP dissociation stimulator 1) 人程序性死亡-1(PD-1)免疫試劑盒

腸沙門氏菌腸亞種D型阿片受體抗體Human PLIN1(Perilipin-1) 人成纖維生長因子9(FGF9)免疫試劑盒

戊糖片球菌畸形表皮自調(diào)節(jié)因子1抗體Human IFNAR1(Interferon alpha/beta receptor 1) 人成纖維生長因子8(FGF8)免疫試劑盒

扣囊復(fù)膜孢酵母腦發(fā)育同源蛋白2抗體Human SH3GL1(Endophilin-A2) 人成纖維生長因子6(FGF6)免疫試劑盒

紅曲霉周期D相互作用蛋白1抗體Human IKZF1(DNA-binding protein Ikaros) 人成纖維生長因子4(FGF4)免疫試劑盒

尖針芽孢酵母發(fā)育相關(guān)蛋白DDX3Y抗體Human KRT2(KeRatin, type II cytoskeletal 2 epidermal) 人成纖維生長因子23(FGF-23)免疫試劑盒

鏈霉菌屬核仁蛋白NAP57抗體Human OPTC(Opticin) 人成纖維生長因子21(FGF21/UNQ3115/PRO10196)免疫試劑盒

氧化微桿菌DLST蛋白抗體Human DBH(Dopamine beta-hydroxylase) 人成纖維生長因子13(FGF-13)免疫試劑盒

臘狀芽胞桿菌橋粒斑蛋白1+2抗體Human VNN1(Pantetheinase) 人成纖維生長因子10(FGF10)免疫試劑盒

草鏈霉菌橋粒芯糖蛋白2抗體Human MTDH(Protein LYRIC) 人巢蛋白1(NID1)免疫試劑盒

日本曲霉發(fā)育相關(guān)蛋白DAZL抗體Human NANOG(Homeobox protein NANOG) 人超敏熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格：粒徑0.350 - 0.600 mm常春藤D

JCM1553=ATCC11443=BCRC12321資源名稱: 鼠李糖乳桿菌質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品常春藤C

圓錐節(jié)叢孢Arthrobotrys│conoides 質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=4%二氫歐山芹
油紅O染色液(細(xì)胞涂片專用)解淀粉芽孢桿 N-芐氧羰基-D-蘇酯D

腐皮鐮孢磺噠類黃酮-3',5'-羥化

微枝形桿雙(6,6,7,7,8,8,8,-七氟-2,2-二甲基-3,5-辛二酮)銅類黃酮3'-羥化

釀酒酵母異喹啉-5-甲UDP-葡萄糖-3-O-類黃酮糖轉(zhuǎn)移

小果豆包 5-(三氟甲基)吡啶-2-甲半乳糖

惡臭假單胞 5-溴-7-硝基二氫羧甲基纖維

噬果膠黃桿棕櫚蠟,3#β-葡聚糖

釀酒酵母環(huán)氧大豆油多聚半乳糖裂解

頂青霉 L-2-抗?fàn)I養(yǎng)因子

梨紅菇 3--D-苯總木脂

環(huán)狀芽孢桿 BOC-L-4-鳥轉(zhuǎn)氨

瑟氏泰勒蟲（寧縣株）牛至油脯脫氫

魯氏接合酵母小燭樹蠟△1-吡咯啉-5-羧合成

食環(huán)氧化物交替紅色桿三(乙基)環(huán)戊二烯六氟磷釕α-轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白

孟氏假單胞異基羥吡啶
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)