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當前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞組織染色>> 快速瑞氏染液
| 貨號 | FS-X9791 |
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產品介紹:
瑞氏染液主要應用于血液和骨髓涂片染色。 操作步驟 1. (選做)平置血涂片于染色架上，滴加甲醇固定液，室溫固定15-30 分鐘。 2. 吸去固定液，室溫通風晾干。 3. 將試劑一滴加到載玻片上，均勻覆蓋住載片上血細胞，染色時間約為1 分鐘。等染液有變紅的趨勢時，迅速滴加兩倍試劑一的量的試劑二。繼續(xù)染色5 到8 分鐘。 4. 小股水流洗片，防止將大量的細胞從載片上沖落下來從而影響以后的觀察。30s 水洗結束后將載片放到陰涼處風干。 5. 顯微鏡鏡檢。 染色結果 1. 紅細胞呈淺紅色，中央稍淡而略有蝶形態(tài)。 2. 白細胞系統(tǒng)清晰易分，細胞膜清晰呈紫黑色，細胞核著色呈深淺不同的紫紅色，胞漿中各種顆粒區(qū)分明顯。其中中性粒細胞漿中顆粒呈淡紫紅色，嗜酸粒細胞漿中顆粒呈桔紅色、嗜堿性粒細胞胞漿中顆粒呈藍褐色。單核細胞的胞漿呈灰藍色，胞漿中顆粒呈細小淡紫紅色或藍紫色。淋巴細胞胞漿呈淡藍色。 注意事項 1. 推片：取全血3 微升左右置載玻片上，將推玻片保持與載玻片30 度角，置于血滴正前方，稍往后移與血滴接觸，即可見血液沿推片下緣散開，再勻速沿載玻片平面向前滑動，至血液鋪完血膜為止。 2. 涂片時不要太厚也不要太薄，太厚紅細胞重疊并易皺，太薄時不易找到白細胞。 3. 用蠟筆在血膜兩頭劃線，平放于染色架上。血膜要干透后才能染色，否則染色時血膜易脫落。 4. 試劑一及二染液不能過少，以防很快蒸發(fā)引起染液沉淀。試劑一不可少于400 微升，試劑二是試劑一的1 倍量。滴加試劑一及二時要輕搖玻片或用洗耳球對準血片吹氣，使染液充分混合。 5. 鏡檢時如果紅細胞偏藍，請放在蒸餾水中1-3 分鐘，直至紅潤為止。 6. 染色過淡，可復染。染色過深，可用水沖洗或浸泡，還可用75%乙醇脫色3-5 秒。 儲存：2～8℃，避光，有效期12個月。 |
中文名稱：快速瑞氏染液
英文名稱：
產品規(guī)格：250ml×3
貨號：FS-X9791
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
肌侵蛋白(MTPN)英文名：MTPN 磷化β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接抗體包裝5g
肌腱蛋白X(TNX)英文名：TNX 磷化β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接抗體包裝5MG
肌肌激(CKM)英文名：CKM 磷化β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接抗體包裝1g
肌紅蛋白(MYO)英文名：MYO 磷化β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接抗體包裝5g
肌三磷(ITPA)英文名：ITPA βA3/A1-crystallin蛋白抗體包裝25g
肌鈣蛋白T()英文名： γS-crystallin蛋白抗體包裝100g
肌動蛋白相關蛋白2/3復合體亞基4(ARPC4)英文名：ARPC4 1號染色體開放閱讀框85抗體包裝25g
饑餓(GHRL)英文名：GHRL 1號染色體開放閱讀框87抗體包裝5g
回腸脂肪結合蛋白(FABP6)英文名：FABP6 1號染色體開放閱讀框95抗體包裝25g
黃體激(LH)英文名：LH 補體C1S鏈多肽抗體包裝5g
脫氫(XDH)英文名：XDH 20號染色體開放閱讀框106抗體包裝50g
緩激肽(BK)英文名：BK 20號染色體開放閱讀框107抗體包裝100g
環(huán)氧化合物解4(EPHX4)英文名：EPHX4 20號染色體開放閱讀框117抗體包裝25g
環(huán)加氧2(PTGS2)英文名：PTGS2 20號染色體開放閱讀框118抗體包裝100g
環(huán)加氧1(PTGS1)英文名：PTGS1 20號染色體開放閱讀框144抗體包裝25g
曲霉Aspergillus│sp. 質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品整合α2試劑盒乙酰紫草;Acetylshikonin
型副傷寒沙門菌Salmonella│paratyphi A 質量規(guī)格：>99.0%,USP34,BR,可用于培養(yǎng)整合A5試劑盒異丹葉大黃;Isorhapontige
花津浦芽孢桿菌Bacillus│hwajinpoensis 質量規(guī)格：>97%,USP34,BR真胰島試劑盒7-乙基;7-Ethylcampt
快速瑞氏染液平菇—875 6-溴-4-羥基-3-喹啉羧乙酯組
異形盤孢 -2-苯乙酯組蛋白H3
蘇云金芽孢桿 苯甲酯組蛋白H4
葡萄座腔 2-脫氧-2,2-二氟-D-赤式-五呋喃糖-3,5-二苯甲酯-1-甲磺酯組蛋白去乙酰化
新城疫病 磺間甲氧嘧啶組蛋白去乙?；?
孢吸水鏈霉 2,5-吡二羧組蛋白去乙酰化3
巴氏醋桿 對乙酮組蛋白去乙?；?
小豆交鏈孢霉 對羥基正辛酯組蛋白乙?；?/span>
副豬嗜血桿 2'--4',5'-二氟苯乙酮組織蛋白B
栗疫 2-甲氧基-3-三氟組織蛋白K
運動節(jié)桿 5-溴-2-苯甲組織蛋白L
芍藥枝孢霉 2-甲氧基-3-三氟甲基-5-溴吡啶組織蛋白S
釀酒酵母 3,5-二氟-4-吡啶甲組織蛋白X
樹舌靈芝 硫化鋰組織多肽抗原
變異鏈霉 亞乙基脲(2-咪唑酮)組織相容性復合體Ⅰ類相關基因A
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