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貨號 | FS-X10090 |
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中文名稱:耐爾藍染色液(Cain法)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:3×50ml
貨號:FS-X10090
產(chǎn)品介紹:
用途: 用于區(qū)分中性脂和酸性脂 注意事項: 也稱尼羅藍染色液,不能放冰箱保存。中性脂呈紅色,脂肪酸呈藍色,復合脂類呈紫色,或深或淺。胞核呈藍色,其他成分為淡藍色。 儲存條件:室溫,避光,12個月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
燦爛類芽孢桿菌磷化DNA甲基轉移1抗體Human SUPT5H (Transcription elongation factor SPT5) 人臂板蛋白3F(S3F)免疫試劑盒
紡錘形賴芽孢桿菌磷化DNA甲基轉移1抗體Human TPRA1 (Transmembrane protein adipocyte-associated 1 homolog) 人臂板蛋白3A(Sema 3A)免疫試劑盒
變異鏈霉菌磷化DNA甲基轉移1抗體Human IGFLR1 (IGF-like family receptor 1) 人吡哆/吡哆維生B6磷(PDXP)免疫試劑盒
腸沙門氏菌腸亞種7脫氫膽固還原抗體Human TCHHL1 (Trichohyalin-like protein 1) 人吡哆/吡哆維生B6激(PDXK)免疫試劑盒
大腸埃希氏桿菌大腦發(fā)育同源蛋白2抗體Human TAP2 (Antigen peptide transporter 2) 人鼻病(RV)抗體(IgA)免疫試劑盒
醬油曲霉退行性精母同源物1抗體Human TMPPE (Transmembrane protein with metallophosphoesterase domain) 人諾龍/去甲睪(NP)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌DSCC1蛋白抗體Human HADHB (Trifunctional enzyme subunit beta, mitochondrial) 人本周蛋白(BJP)免疫試劑盒
玉蜀黍赤霉誘捕受體2抗體Human TRMU (Mitochondrial tRNA-specific 2-thiouridylase 1) 人胞質動力蛋白(CD)免疫試劑盒
毛柄金錢菌(金針菇)DNA甲基轉移相關蛋白1抗體Human TRIO (Triple functional domain protein) 人胞外超氧化物歧化(SOD3)免疫試劑盒
錐形赤褶菇2-3減數(shù)分裂同源蛋白DMC1抗體Human SUPT5H (Transcription elongation factor SPT5) 人胞漿型磷脂A2-α(cPLA2-α)免疫試劑盒
威氏芽孢桿菌DNA連接3抗體Human DAO(D-amino-acid oxidase) 人包蟲抗體IgG 免疫試劑盒
豬丹絲菌磷化DNA依賴性蛋白激抗體Human TPRA1 (Transmembrane protein adipocyte-associated 1 homolog) 人膀胱腫瘤抗原(BTA)免疫試劑盒
枯草芽胞桿菌磷化DNA依賴性蛋白激抗體Human TMPPE (Transmembrane protein with metallophosphoesterase domain) 人膀胱癌抗原(UBC)免疫試劑盒
希爾青霉DNA聚合δ2/DNA pol δ 2抗體Human IGFLR1 (IGF-like family receptor 1) 人伴侶蛋白10(CPN10)免疫試劑盒
畢赤酵母DNA聚合δ催化亞單位/DNA pol δ cat抗體Human TRAF3IP3 (TRAF3-interacting JNK-activating modulator) 人半乳糖凝集-7(Gal-7)免疫試劑盒
蠟狀芽孢桿菌DNA聚合η抗體Human TBKBP1 (TANK-binding kinase 1-binding protein 1) 人半乳糖(Galactose)免疫試劑盒
地衣芽孢桿菌Bacillus│licheniformis 質量規(guī)格:1000μg/ml,溶劑:1.5 mol/L HNO3土荊皮
芽胞桿菌Bacillus│sp. 質量規(guī)格:1000mg/l,溶劑:1%硫原花青B1
鹽單胞菌Halomonas│sp. 質量規(guī)格:500mg/l,溶劑:1%硫里奧林
耐爾藍染色液(Cain法)Lactococcus 5-溴-2-甲基-4-內切-β-1,4-葡聚糖
棒曲霉 3-甲基-3-苯基縮水甘油乙酯(異構體混合物)NADP依賴性甘油-3-磷脫氫
香茅假單胞 氨基鈉海藻糖-6-磷合成
放射形根瘤 葡萄糖-6-磷
孤島鹽單胞 硫亞鐵七水合物葡萄糖-1-磷
海南小短桿 硝鐵(III) 九水合物
梾木生殼針孢 2,2-二苯基烷磷葡萄糖變位
植物乳桿植物亞種 3-羥基谷氨酰tRNA還原
枯草芽孢桿 桂異酯5-氨基乙酰合成
燼灰紅鏈霉果糖發(fā)酵亞種 磷鋅酮
賴芽胞桿屬 3-溴-4-氟苯甲蕓苔內酯
根瘤 3-溴-4-氟苯甲脂肪合成
木蹄層孔 氟化銀(I)乙脫氫
黑木耳 化錳乳脫氫
植物乳桿 -3-羧乙酯酮脫羧
蘇丹黑B染色液(細胞專用)
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