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貨號 | FS-X10091 |
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產(chǎn)品介紹:
用途: 脂肪/脂滴染色 注意事項: 主要由油紅O異丙醇飽和液組成,染色后脂滴呈橘紅色。 儲存條件:室溫,12個月 |
中文名稱:改良油紅O染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:2×50ml|2×100ml
貨號:FS-X10091
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
擬枝孢鐮孢DNA聚合γ/DNA pol γ抗體Human TEFM (Transcription elongation factor, mitochondrial) 人板層相關(guān)多肽2亞型α(TMPO)免疫試劑盒
污黑腐皮殼DNA聚合ι/DNA pol ι抗體Human TP53RK (TP53-regulating kinase) 人瘢痕性天皰瘡抗體(CP)免疫試劑盒
黃硬皮馬勃DNA聚合κ/DNA pol κ抗體Human TANK (TRAF family member-associated NF-kappa-B activator) 人百日咳病抗體(IgM)免疫試劑盒
粘帚霉屬DNA聚合λ/DNA pol λ抗體Human TSKS (Testis-specific serine kinase substrate) 人百日咳病抗體(IgA)免疫試劑盒
雙孢蘑菇DNA聚合μ/DNA pol μ抗體Human TOPORS (E3 ubiquitin-protein ligase Topors) 人白血病抑制因子受體(LIFR)免疫試劑盒
費氏中華根瘤菌周期蛋白3抗體Human ADA(Adenosine deaminase) 人白酯(LE)免疫試劑盒
匿名曲霉DNAJC9蛋白抗體Human ELOVL1(Elongation of very long chain fatty acids protein 1) 人白免疫球蛋白樣受體亞家族B成員4(LILRB4)免疫試劑盒
干草寒冷桿菌DNA甲基轉(zhuǎn)移2抗體Human TBCK (TBC domain-containing protein kinase-like protein) 人白抗原DR(HLA-DR)免疫試劑盒
豬丹絲菌DNA甲基轉(zhuǎn)移3L抗體Human TBKBP1 (TANK-binding kinase 1-binding protein 1) 人白活化黏附因子(ALCAM)免疫試劑盒
卵孢木霉二肽基肽10抗體Human PERP (p53 apoptosis effector related to PMP-22) 人白調(diào)節(jié)(LR)免疫試劑盒
蠟狀芽孢桿菌二肽基肽3抗體Human TSKS (Testis-specific serine kinase substrate) 人白色念珠菌(C.albicans)免疫試劑盒
聚生殼菌DNA復(fù)制相關(guān)元件結(jié)合因子抗體Human TP53RK (TP53-regulating kinase) 人白三烯E4(LTE4)免疫試劑盒
伊平屋橋大洋芽孢桿菌B淋巴轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白DRIL1抗體Human TRAPPC12 (Trafficking protein particle complex subunit 12) 人白三烯D4(LTD4)免疫試劑盒
頂青霉轉(zhuǎn)錄共激活因子130抗體Human TANK (TRAF family member-associated NF-kappa-B activator) 人白三烯C4(LTC4)免疫試劑盒
耐久腸球菌核糖核3/Drosha抗體Human TOX (Thymocyte selection-associated high mobility group box protein TOX) 人白三烯B4(LTB4)免疫試劑盒
豇豆慢生根瘤菌脫氧胸激DTYMK抗體Human TRHR (Thyrotropin-releasing hormone receptor) 人白介增強子結(jié)合因子2(ILF2/NF45/PRO3063)免疫試劑盒
毛木耳Auricularia│polytricha 質(zhì)量規(guī)格:三價鉻標(biāo)準溶液1000μg/ml羅漢果VI
ATCC15491資源名稱: 大腸埃希氏菌 質(zhì)量規(guī)格:500mg/L,溶劑:羅漢果IV
馬克斯克魯維酵母Kluyveromyces│marxianus 質(zhì)量規(guī)格:100µg/mL,基體:羅漢果III
改良油紅O染色液蟲類神食酵母 L-組氨酰-L-亮總糖
桔橙小單孢 4-硝基-1-萘還原糖
白鵝膏(不可訂購) 化亞鐵,無水激動
沃氏富鹽 氟化鈰二酰
相思根瘤 4-香豆
核盤 磷氫鈣 無水精激
巨獸芽孢桿 二乙氧基基硅烷赤霉4
尖孢鐮孢 乙柏木酯赤霉7
硝基還原假單胞 N-芐基-3-吡咯烷酮二氫玉核
浙江芽孢桿 3-氧雜環(huán)丁肉桂脫氫
紫芝(紫靈芝,中華靈芝) 1-對甲苯磺?;?3-硝基-1,2,4-三唑纖維
黃曲霉 1,3-二異喹啉1,5-二磷核酮糖
淡紫擬青霉 2-溴-5-甲生長釋放肽
猴頭 3--4-吡啶螯合肽
冬蟲夏草 2-氨基-6-氟苯金屬忍耐蛋白
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