油紅染色試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9793

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：油紅染色試劑盒

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100T

貨號(hào)：FS-X9793

產(chǎn)品介紹:

油紅屬于偶氮染料，是很強(qiáng)的脂溶劑和染脂劑，與甘油三酯結(jié)合呈小脂滴狀。

脂溶性染料能溶于組織和細(xì)胞中的脂類，它在脂類中的溶解度比在溶劑中大。當(dāng)組織切片置人染液時(shí)，染料則離開(kāi)染液而溶于組織內(nèi)的脂質(zhì)(如脂滴)中，使組織內(nèi)的脂滴呈橘紅色。

操作步驟：

1. 先小心倒掉培養(yǎng)基，用PBS 漂洗1 次

2. 加10%中性固定30 分鐘；

3. PBS 漂洗2 次

4. 孵育液孵育5 分鐘。

5. 60℃溫箱內(nèi)，油紅染液染色10min。

6. 用脫色液A 漂洗2 次。

7. 用脫色液B 漂洗2 次。

8. 蘇木素復(fù)染20-60s。

9. 用脫色液B 漂洗2 次。

10. 封片保存。

11. 顯微鏡觀察，組織細(xì)胞中脂滴呈橘紅色，核呈藍(lán)色。

儲(chǔ)存：2～8℃，有效期一年。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

核糖核A3(RNASE3)英文名：RNASE3 22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框15抗體包裝1g

核受體亞家族3C組成員1(NR3C1)英文名：NR3C1 22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框13抗體包裝25g

核仁(NCL)英文名：NCL 22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框26抗體包裝5g

核仁磷蛋白(NPM)英文名：NPM 補(bǔ)體C2b鏈多肽抗體包裝1g

核連蛋白1(NUCB1)英文名：NUCB1 2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框16抗體包裝5g

核還原M1(RRM1)英文名：RRM1 2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框27抗體包裝25g

和肽(CPP)英文名：CPP 磷化δ連環(huán)蛋白抗體包裝5g

含血管性血友病因子A域蛋白3A(vWA3A)英文名：vWA3A 磷化δ連環(huán)蛋白抗體包裝1g

含血管性血友病因子A域蛋白1(vWA1)英文名：vWA1 磷化δ連環(huán)蛋白抗體包裝5g

含銅胺氧化3(AOC3)英文名：AOC3 磷化δ連環(huán)蛋白抗體包裝1g

含亮豐富重復(fù)蛋白3C(LRRC3C)英文名：LRRC3C 磷化δ連環(huán)蛋白抗體包裝5g

含TCP1伴侶蛋白亞基2(CCT2)英文名：CCT2 磷化δ連環(huán)蛋白抗體包裝25g

含STIP1同源物U-框蛋白1(STUB1)英文名：STUB1 22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框43抗體包裝5g

含IQ基元GTP激活蛋白2(IQGAP2)英文名：IQGAP2 C2CD3蛋白抗體包裝100g

含IQ基元GTP激活蛋白1(IQGAP1)英文名：IQGAP1 半胱蛋白蛋白14抗體包裝25g

鮑氏志賀菌Shigella│boydii 質(zhì)量規(guī)格：> 99%,BR,可用于培養(yǎng)粘蛋白3試劑盒異香草;Isovanillic Aci

草螺菌屬Herbaspirillum│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR粘蛋白2試劑盒煙堿;L-Nicotine

光黑腹菌Rhizopogon│piceus Berk. & M.A. Curtis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>97%,標(biāo)準(zhǔn)品增殖誘導(dǎo)配體試劑盒3-異倒捻子;3-isomangost
油紅染色試劑盒大腸埃希

平臍蠕孢 -1-苯乙酯ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1

紅色皺紋單胞 N-哌甲乙酯膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白

平臍蠕孢芐基三丁基三溴化谷脫氫

大麗花輪枝孢（棉花黃萎?。?/span> 鋯硅鈉萊姆病IgG抗體

七鉬胸腺β10

玫瑰紫青霉 3,4-二肉桂(反式)磷二酯5

Chitinophaga rupis 鎳鋁粒巨噬集落激因子抗體

棕黑腐質(zhì)霉 2,5-二氟苯磺酰綠膿桿外A

黑根霉 4-溴丁基苯基β氨基己糖

聚生殼 5,6-二甲氧基-2-(4-甲基)-1-茚酮鹽鹽芳香N-乙酰化轉(zhuǎn)移

炭疽芽胞桿 4-(5-溴-3--2-吡啶基)嗎啉白酯

解淀粉芽孢桿 4-羥基扁桃唾液

羊肚（不能訂購(gòu)） 2--4-(4-苯氧基)苯乙酮DNA甲基化轉(zhuǎn)移

釀酒酵母 5-氨基-2-萘磺腸道病71型
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)