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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
貨號(hào) | FS-X9889 |
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產(chǎn)品介紹:
用途: 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡 注意事項(xiàng): 自備乙醇70%和PBS,流式細(xì)胞儀488nm處檢測(cè)紅色熒光 儲(chǔ)存條件:-20℃,避光,12個(gè)月 |
中文名稱:細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:50T
貨號(hào):FS-X9889
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
裂褶菌AP-1μ2抗體Human LRRC8C 小鼠胰島樣生長(zhǎng)因子1受體(IGF-1R)免疫試劑盒
柱形孢鏈霉菌肥大膜抑制性受體Allergin1抗體Human LRRC52 小鼠胰島樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)免疫試劑盒
傳染性支氣管炎病腦鈉通道蛋白1抗體Human LSAMP 小鼠胰島受體β(ISR-β)免疫試劑盒
土庫(kù)曼野野村氏菌肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2/3復(fù)合亞單位B1抗體Human LRWD1(Leucine-rich repeat and WD repeat-containing protein 1) 小鼠胰島降解(IDE)免疫試劑盒
黑木耳三磷腺結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2抗體Human LSG1 小鼠胰島(INS)免疫試劑盒
黃桿菌甲胎蛋白抗體Human LSM1 小鼠原激活肽(TAP)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體Human LRRC29 小鼠-1(trypsin-1)免疫試劑盒
檸檬形克勒克酵母ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體Human LRRC41 小鼠(trypsin)免疫試劑盒
球孢白僵菌肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白LIM蛋白3抗體Human LRRC47 小鼠胰α淀粉(AMY2A)免疫試劑盒
Rhizobium alkalisoli性鈣調(diào)蛋白3抗體Human LRRC47 小鼠一氧化碳血紅蛋白(HbCO)免疫試劑盒
產(chǎn)腸大腸埃希氏菌磷化CD156b抗體Human LRRC4C 小鼠一氧化氮合成(NOS)免疫試劑盒
產(chǎn)朊假絲酵母乙脫氫5抗體Human LSG1 小鼠一氧化氮(NO)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌乙脫氫6抗體Human LRRC52 小鼠葉(FA)免疫試劑盒
假單胞菌溶血磷脂?;D(zhuǎn)移5抗體Human LRRC18 小鼠氧化型(GSSG)免疫試劑盒
粉狀畢赤酵母遺傳性失明相關(guān)蛋白AIPL1抗體Human LRCH3 小鼠氧化高密度脂蛋白(Ox-HDL)免疫試劑盒
灰樹花G25免疫調(diào)節(jié)蛋白AIRE抗體Human LRRC20 小鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)免疫試劑盒
檸檬球菌Citricoccus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BC胞外超氧化物歧化試劑盒3-乙南美楝屬二酯
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR胞漿型磷脂A2-α試劑盒乙?;涿牢恫軦
傘枝犁頭霉Absidia│corymbifera 質(zhì)量規(guī)格:BR包蟲抗體IgG 羽扇烯
細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒曲霉 4-溴-9,9'-螺二芴抗RA33IgG抗體
Bacillus tequilensis Nα-對(duì)甲苯磺酰-L-精半胱蛋白10
科氏葡萄球科氏亞種 2,2-雙(4-氧苯基)烷基質(zhì)金屬蛋白9
水生哈薩克斯坦酵母 5,6,7,7a-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2(4H)-酮鹽鹽碳酐
美味牛肝 α-(4-基)二苯甲絲脫水
大腸埃希氏 利賽膦鈉抗膜聯(lián)蛋白A5抗體
爪哇根霉 N-Cbz-L-蛋抗磷脂酰乙抗體
鏈格孢 3-羥基-3-甲基-2-丁酮蛋白S抗體
枯草芽胞桿 3,4-二氟苯甲蛋白C抗體
囊毛霉 4-(二甲基氨基)苯鹽鹽抗波形蛋白抗體
枯草芽孢桿 4-溴-2-氟β2糖蛋白抗體
金白F4(金針菇) 4-溴-2-氟-芐泛化蛋白
美澳型核果褐腐病 Boc-L-2,4-二苯載脂蛋白F
季也蒙邁耶氏酵母 N-(叔丁氧羰基)-3-氟-L-苯γ-谷氨?;D(zhuǎn)氨5
嗜熱脂肪芽胞桿 D-2,4-二苯烯酰水合1
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