木栓化細胞壁染色液(蘇丹染色法)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10185

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：木栓化細胞壁染色液(蘇丹染色法)

英文名稱：

產品規(guī)格：50ml

貨號：FS-X10185

產品介紹:

用途：

主要用于新鮮組織切片以及經乙醇、FAA固定液固定、冰凍干燥的組織切片等樣本的角質化細胞壁或者栓質化細胞壁的染色觀察，如有，則有橘紅色的顏色反應。

儲存條件：室溫，避光，12個月

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

黑曲霉甘肽受體3抗體Human UBE3C 大鼠胰島受體底物1(IRS-1)免疫試劑盒

葡萄座腔菌腦腸肽受體抗體Human UBE4A 大鼠胰島受體β(ISR-β)免疫試劑盒

龜裂鏈霉菌GRC5蛋白抗體Human UBE2G1 大鼠胰島降解(IDE)免疫試劑盒

枯草芽胞桿菌腸和大腦特定同源蛋白1抗體Human UBE2G2 大鼠胰島(INS)免疫試劑盒

金黃殼囊孢生長分化因子6抗體Human UBE2J2 大鼠原(Try)免疫試劑盒

暗孢毛殼鳥核交換因子GEFT抗體Human IDH2(IsocitRate dehydrogenase [NADP], mitochondrial) 大鼠原激活肽(TAP)免疫試劑盒

白黑鏈霉菌膠漿成熟因子β抗體Human UBE4B 大鼠原-1 免疫試劑盒

灰樹花蛋白偶聯受體56抗體Human UBE2H 大鼠(trypsin)免疫試劑盒

植物乳桿菌腸和大腦特定同源蛋白2抗體Human UBE2K 大鼠一氧化碳血紅蛋白(HbCO)免疫試劑盒

沼澤紅假單胞菌甘轉運蛋白1抗體Human UBL3 大鼠一氧化氮合成(NOS)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌生長激釋放激同源盒蛋白1抗體Human UGCGL2 大鼠一氧化氮(NO)免疫試劑盒

不動桿菌血型糖蛋白δ抗體Human UGDH 大鼠葉(FA)免疫試劑盒

Arthrobacter谷受體1抗體Human UBXN10 大鼠氧還原蛋白過氧化物2(PRDX2)免疫試劑盒

德氏乳桿菌保加利亞亞種味覺受體蛋白家族10亞基5抗體Human UBE2H 大鼠氧化型(GSSG)免疫試劑盒

黃桿菌磷化谷受體1抗體Human UBE2J2 大鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)免疫試劑盒

新城疫病磷化谷受體1抗體Human IDH2(IsocitRate dehydrogenase [NADP], mitochondrial) 大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)免疫試劑盒

少根根霉Rhizopus│arrhizus 質量規(guī)格：藥物脫色,200目老鸛草

AS2.1737資源名稱: 橄欖假絲酵母質量規(guī)格：培養(yǎng)級三七皂R2(R型)

產酒石不動桿菌Acinetobacter│tartarogenes 質量規(guī)格：植物培養(yǎng)級三七皂Ft1
木栓化細胞壁染色液(蘇丹染色法)糖化酵母 3-氟-2-酪酪肽

側耳 2--6-氟甲苯類風濕因子

綠色木霉 N-芐氧羰基-DL-蛋類胰蛋白

芽孢桿屬乙基粒集落激因子

硬毛栓孔 O-琥珀酰亞-1,3-二甲基基脲六氟磷鹽粒巨噬集落激因子

拜氏色鹽桿 2-氨基-4,5-二氟裂解型糖基化終末產物受體

多根硬皮馬勃 1-芐基高哌α

釀酒酵母 N-甲基亞氨二乙功能相關抗原1

平菇 1-二乙基-2-磷二酯

芽枝狀枝孢 2-(4-乙氧基苯基)-2-甲基磷二酯3B

小馬勃雙(2,4,4-基戊基)膦磷甘油激

溶藻弧 3-乙酰基-7氮雜磷果糖激1

蟬花* 6-叔丁基-4--噻吩[2,3-D]嘧啶磷化AKT蛋白

哈茨木霉 2,4,6-三羥基磷化p38絲裂原活化蛋白激

閃光須霉 4-甲氧基-2,3,5,6-四氟苯甲磷化Tau蛋白
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)