細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：正常小鼠睪丸Sertoli細胞    

產(chǎn)品英文：TM4

貨號：FS-01X9699

細胞培養(yǎng)條件：DMEM/F12+2.5%FBS+5%馬血清+1%P/S

生長狀態(tài)：貼壁生長

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運輸溫度（℃）：常溫   

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

注意事項：

人水通道蛋白5(AQP-5)ELISA試劑盒Human Aquaporin 5,AQP-5 ELISA Kit

人水通道蛋白4(AQP-4)ELISA試劑盒Human Aquaporin 4,AQP-4 ELISA Kit

人水通道蛋白3(AQP-3)ELISA試劑盒Human Aquaporin 3,AQP-3 ELISA Kit

人水通道蛋白1(AQP-1)ELISA試劑盒Human Aquaporin 1,AQP-1 ELISA Kit

人水通道蛋白0(AQP-0)ELISA試劑盒Human Aquaporin 0,AQP-0 ELISA Kit

人類風濕因子(RF)ELISA試劑盒Human rheumatoid factor,RF ELISA Kit

人抗鏈球菌溶血O/抗O(ASO)ELISA試劑盒Human anti-streptolysin O,ASO ELISA Kit

人腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)ELISA試劑盒Human adrenal cortex antibody,ACA ELISA Kit

人抗腎小球基底膜抗體(GBM)ELISA試劑盒Human glomerular basement membrane antibogy,GBM ELISA Kit

人β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA試劑盒human β2-microglobulin,BMG/β2-MG ELISA Kit

人膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA試劑盒 Human Annexin Ⅴ,ANX-Ⅴ ELISA Kit

人抗腎小管基底膜抗體(TBM)ELISA試劑盒Human tubular basement membrane antibogy,TBM ELISA Kit

人apelin 13(AP13)ELISA試劑盒 Human apelin 13,AP13 ELISA Kit

人Apelin 36(AP36)ELISA試劑盒Human Apelin 36,AP12 ELISA Kit

人血管緊張Ⅱ受體Ⅰa型(AgtrⅠa)ELISA試劑盒human angiotensin Ⅱ receptor type Ⅰa,AgtrⅠa ELISA Kit

人血管生成樣蛋白3(ANGPTL3)ELISA試劑盒Human angiopoietin-like protein 3,ANGPTL3 ELISA Kit

人α肌動蛋白(α Actin)ELISA試劑盒Human Alpha-Actin,α Actin ELISA Kit

人心肌錨蛋白重復域1(ANKRD1)ELISA試劑盒Human cardiac ankyrin repeat domain 1,ANKRD1 ELISA Kit

人瘦受體(LEPR)ELISA試劑盒 Human Leptin Receptor,LEPR ELISA Kit
正常小鼠睪丸Sertoli細胞SESN3  Sestrin3抗體規(guī)格: 0.2ml

LSP1  白細胞F肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

E-cadherin/CD324  上皮鈣粘附分子抗體規(guī)格: 0.1ml

RUNX1T1/ETO  周期D相關(guān)蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

LARG  Rho的鳥核交換因子12抗體規(guī)格: 0.2ml

SCHIP1/IQCJ  IQCJ抗體規(guī)格: 0.1ml

SEZ6L  癲癇樣相關(guān)蛋白6抗體規(guī)格: 0.2ml

SHPRH  組蛋白連接作用蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。