細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：大鼠腦間質細胞    

產(chǎn)品英文：DI TNC1

貨號：FS-01X9709

細胞培養(yǎng)條件：DMEM+10%FBS+1%P/S  

生長狀態(tài)：貼壁生長

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運輸溫度（℃）：常溫   

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

注意事項：

人胰島樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒 英文名稱：Human insulin-like growth factors 1，IGF-1 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人γ干擾(IFN-γ)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Interferon γ ，IFN-γ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒 英文名稱：Human intercellular adhesion molecule 1，ICAM-1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人肝細胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒 英文名稱：Human hepatocyte growth factor，HGF ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人中性粒細胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA試劑盒英文名稱：Human neutrophil activating protein-2，NAP-2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人趨化因子(fractalkine/CX3CL1) ELISA試劑盒英文名稱：Human fractalkine/CX3CL1 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人堿性成纖維細胞生長因子9(bFGF-9)ELISA試劑盒英文名稱：Human basic fibroblast growth factor 9，bFGF-9 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人E選擇(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒 英文名稱：Human E-Selectin ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人鼠嗜粒細胞趨化因子(ECF)ELISA試劑盒英文名稱：Human eosinophil chemotactic factor，ECF ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人CD30分子(CD30)ELISA試劑盒英文名稱：Human Cluster of differentiation 30，CD30 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人白細胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA試劑盒英文名稱：Human Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule，ALCAM ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人活化A(ACV-A)ELISA試劑盒英文名稱：Human Activin A，ACV-A ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人心鈉(ANP)ELISA試劑盒英文名稱：Human Atrial Natriuretic Peptide，ANP ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人內-2(EM-2)ELISA試劑盒英文名稱：Human endomorphin-2，EM-2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人α-內(α-EP)ELISA試劑盒英文名稱：Human α-Endomorphin，α-EP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人抑制(INH)ELISA試劑盒英文名稱：Human Inhibin，INH ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人6-羥多巴(6-OHDA)ELISA試劑盒 英文名稱：Human 6-hydroxydopamine，6-OHDA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人心納(ANF)ELISA試劑盒 英文名稱：Human atrial natriuretic factor，ANF ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠腦間質細胞phospho-SOX9(Ser181)  磷化轉錄因子SOX9蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

H3-K4-HMTase SETD7  組蛋白H4-K4甲基轉移抗體規(guī)格: 0.2ml

Slitrk1  神經(jīng)突出相關蛋白Slitrk1抗體規(guī)格: 0.2ml

Sclerostin  骨形態(tài)發(fā)生抑制蛋白SOST抗體規(guī)格: 0.2ml

SPINT2/HAI2/HGFA Inhibitor 2  肝細胞生長因子激活抑制蛋白2抗體規(guī)格: 0.1ml

TGM2/TG2/Transglutaminase 2  轉2抗體規(guī)格: 0.1ml

TIM4  T淋巴細胞膜蛋白4抗體規(guī)格: 0.1ml

TROP2/TACD2  細胞表面糖蛋白Trop2抗體（胰腺癌標志物蛋白）規(guī)格: 0.1ml
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。