αKGDHα酮戊二酸脫氫酶紫外分光光度法-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-01S63458

公司產(chǎn)品僅用于科研提供的生化試劑盒，質(zhì)量信得過產(chǎn)品，售后完善。服務(wù)于高校及免疫學(xué)科研單位，竭誠(chéng)為您提供更周到的服務(wù)更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品。

產(chǎn)品名稱：αKGDHα酮戊二酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒紫外分光光度法

規(guī)格：50管/48樣

檢測(cè)方法：紫外分光光度法

貨號(hào)：FS-01S63458
商品介紹：

測(cè)定意義

α-KGDH（EC 1.2.4.2）廣泛存在于動(dòng)物、植物微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，是三羧酸循環(huán)調(diào)控關(guān)鍵酶之一，催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶。

測(cè)定原理

α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和輔酶生成琥珀酰輔酶、二氧化碳和 NADH，NADH在340 nm有特征吸收峰，以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 200μL×1 支，4℃保存；

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。
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粗酶液提?。?/span>

1、細(xì)胞或組織樣品的制備：

培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。

生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白10(Grb10)聯(lián)免疫試劑盒匍枝根霉原變種PD-L1 (E1L3N®) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)

生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白14(Grb14)聯(lián)免疫試劑盒白僵mTOR (7C10) Rabbit mAb (PE Conjugate)

生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白2(Grb2)聯(lián)免疫試劑盒香菇—五香1號(hào)DYKDDDDK Tag (D6W5B) Rabbit mAb (Binds to same epitope as Sigma's Anti-FLAG® M2 Antibody) (Alexa Fluor® 488 Conjugate)

生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白7(Grb7)聯(lián)免疫試劑盒釀酒酵母DYKDDDDK Tag (D6W5B) Rabbit mAb (Binds to same epitope as Sigma's Anti-FLAG® M2 Antibody) (Alexa Fluor® 647 Conjugate)

食欲B/阿立新B(OXB)聯(lián)免疫試劑盒猴假單胞DYKDDDDK Tag (D6W5B) Rabbit mAb (Binds to same epitope as Sigma's Anti-FLAG® M2 Antibody) (Pacific Blue™ Conjugate)

視黃誘導(dǎo)基因/RIG-1樣受體(RLR)聯(lián)免疫試劑盒奇異球Atg2A Antibody

視網(wǎng)膜母瘤蛋白1(RB1)聯(lián)免疫試劑盒盤孢Phospho-Tau (Ser416) (D7U2P) Rabbit mAb

視網(wǎng)膜母瘤抑制蛋白(PRB)聯(lián)免疫試劑盒釀酒酵母Phospho-Tau (Ser416) (D7U2P) Rabbit mAb

嗜環(huán)蛋白/親環(huán)A(CYPA)聯(lián)免疫試劑盒鍺栓孔R(shí)ad54 (D4W3Z) Rabbit mAb

嗜環(huán)蛋白/親環(huán)B(CYPB)聯(lián)免疫試劑盒芽胞桿Animal-Free Blocking Solution (5X)

嗜環(huán)蛋白/親環(huán)D(CYPD)聯(lián)免疫試劑盒中國(guó)臺(tái)灣根霉Animal-Free Blocking Solution (5X)

神經(jīng)纖維網(wǎng)蛋白2(NRP2)聯(lián)免疫試劑盒蘋果落葉交鏈孢霉DAPT

檸檬合(CS)聯(lián)免疫試劑盒假單胞屬Actinomycin D

8-羥基鳥糖苷1(OGG1)聯(lián)免疫試劑盒硬結(jié)節(jié)桿Carfilzomib

嗜粒趨化因子受體(ECFR)聯(lián)免疫試劑盒根瘤His-Tag (D3I1O) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)
αKGDHα酮戊二酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒紫外分光光度法自噬相關(guān)蛋白18抗體Human MARVELD3 ELISA Kit人補(bǔ)體7（C7）ELISA試劑盒,

自噬相關(guān)蛋白4A抗體Human MAS1L ELISA Kit小鼠氧化低密度脂蛋白抗體（OLAb）ELISA試劑盒,

載脂蛋白A4抗體Human MAST1 ELISA Kit兔子γ干擾（IFN-γ）ELISA試劑盒,

12脂氧合抗體Human MAST3 ELISA Kit間粘附分子1（ICAM-1/CD54）ELISA試劑盒--動(dòng)物，人

血管緊張III抗體Human C10orf58(Redox-regulatory protein FAM213A) ELISA Kit多肽YY（Peptide-YY）ELISA試劑盒--動(dòng)物，人

腺苷環(huán)化3抗體Human NY-ESO-1(Cancer/testis antigen 1) ELISA Kit抗中性粒/中心體抗體（ACA）ELISA試劑盒--動(dòng)物，人

血管動(dòng)蛋白抗體Human Caspase 12 ELISA Kit艾柯病IgM（ECHO IgM）ELISA試劑盒--動(dòng)物，人

腺病早期E1A蛋白抗體Human CD320 ELISA Kit糖蛋白130（gp130）ELISA試劑盒--動(dòng)物，人