海水藻保存液Ⅰ-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10188

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：海水藻保存液Ⅰ

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

貨號：FS-X10188

產(chǎn)品介紹:

用途：

含有福爾馬林、乙酸、乙醇等。

注意事項：

推薦用于海水藻類的保存。此類保存液不能保色，如需保色，需用此保存液作用1-2天后轉(zhuǎn)入保色液中長期保存。

儲存條件：室溫，避光，12個月

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

紫丁香蘑赤霉抗體Human UBC 大鼠血紅結(jié)合蛋白(HPX)免疫試劑盒

生孢梭菌鳥核結(jié)合蛋白X抗體Human TTLL10 大鼠血紅蛋白(Hb)免疫試劑盒

紫晶口磨GRAM結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體Human TWF1 大鼠血管性血友病因子裂解(vWF-cp)免疫試劑盒

蘇云金芽胞桿菌γ-谷酰轉(zhuǎn)移輕鏈2抗體Human TUSC5 大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉輔因子(VWF)免疫試劑盒

假單胞菌屬原鈣粘蛋白γA1抗體Human TTRAP 大鼠血管舒緩激肽(BK)免疫試劑盒

日本裂殖酵母G蛋白偶聯(lián)受體70抗體Human TWIST1(Twist-related protein 1) 大鼠血管生成抑制因子免疫試劑盒

杜氏籃狀菌G蛋白偶聯(lián)受體71抗體Human TUB 大鼠血管生成樣蛋白6(ANGPTL6)免疫試劑盒

地中海中慢生根瘤菌谷受體δ2/GluR-δ2抗體Human TWIST2 大鼠血管生成樣蛋白3(ANGPTL3)免疫試劑盒

季也蒙邁耶氏酵母血型糖蛋白A/涎糖蛋白抗體Human TUBGCP3 大鼠血管生成4(ANG-4)免疫試劑盒

釀酒酵母谷脫羧67抗體Human TWSG1 大鼠血管生成2(ANG-2)免疫試劑盒

布魯氏菌生物Ⅰ型生長抑制DNA損傷基因45抗體Human DNM2(Dynamin-2) 大鼠血管生成1(ANG-1)免疫試劑盒

擬青霉胃泌抑制肽抗體Human TUSC4 大鼠血管生長(ANG)免疫試劑盒

綠色木霉葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4抗體Human C19orf80(Betatrophin) 大鼠血管內(nèi)皮粘附分子1(VCAM-1)免疫試劑盒

盤長孢狀盤孢磷脂?；鞍拙厶?/span>-3抗體Human TTK 大鼠血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR-2)免疫試劑盒

小腸腸球菌糖皮質(zhì)激受體抗體Human TTL 大鼠血管內(nèi)皮生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)免疫試劑盒

濟(jì)州古名氣微菌胰高血糖樣肽-1抗體Human TUSC5 大鼠血管內(nèi)皮生長因子D(VEGF-D)免疫試劑盒

球二孢Botryodiplodia│sp. 質(zhì)量規(guī)格：2-3mm,球形丹D

小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格：20-40目,氣相、液相色譜柱丹C

: CI-104資源名稱: 牛型分枝桿菌質(zhì)量規(guī)格：40-60目,氣相、液相色譜柱遠(yuǎn)志山III
海水藻保存液Ⅰ越南芽孢桿 2-硝基-4--6-溴苯末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9

釀酒酵母 1,2-二溴四氟苯鈉-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)載體1

Gordonia 扁桃乙酯腦鈉;腦鈉尿肽

膠韌革(榆耳，榆蘑) 3-溴-4-氟甲酯腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子

異常漢遜酵母 5-氨基-1-苯基吡唑內(nèi)

聚多曲霉 N-十六烷基苯甲酰內(nèi)皮

矩圓黑盤孢 2,6-二-5-氟煙內(nèi)皮1

馬克斯克魯維酵母 3-基-2,6-二-5-氟吡啶內(nèi)皮型一氧化氮合

三骨菇 2-苯基異丁內(nèi)皮脂肪

雜色曲霉 3-氟-4-內(nèi)源性分泌型糖基化終末產(chǎn)物受體

中華芽孢桿 4-戊基雙環(huán)己內(nèi)脂

枯草芽孢桿 3-氨基-5-叔丁基吡唑黏著斑激

山楂生葉點(diǎn)霉 2-重氮乙酰乙對硝基芐酯尿蛋白

巴氏醋桿 2-氨基-3-氟尿二磷葡萄糖轉(zhuǎn)移1

產(chǎn)氨短桿 4-甲氧基芐尿肌酐
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)