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當(dāng)前位置：上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 海水藻保存液Ⅱ
| 貨號(hào) | FS-X10189 |
|---|
中文名稱：海水藻保存液Ⅱ
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：100ml
貨號(hào)：FS-X10189
產(chǎn)品介紹:
用途： 含有福爾馬林、甘油等。 注意事項(xiàng)： 推薦用于海水藻類的保存。此類保存液不能保色，如需保色，需用此保存液作用1-2天后轉(zhuǎn)入保色液中長(zhǎng)期保存。 儲(chǔ)存條件：室溫，避光，12個(gè)月 |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
伴放線菌團(tuán)聚桿菌葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3抗體Human TTLL10 大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C(VEGF-C)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌凝溶膠蛋白抗體Human TWF1 大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子B(VEGF-B)免疫試劑盒
膠孢生長(zhǎng)激釋放激抗體Human TTRAP 大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)免疫試劑盒
堿湖迪茨氏菌膠質(zhì)纖維性蛋白抗體Human TWIST1(Twist-related protein 1) 大鼠血管緊張轉(zhuǎn)化2(ACE2)免疫試劑盒
雜色曲霉綠色熒光蛋白（免疫組化用抗體）Human TUB 大鼠血管緊張轉(zhuǎn)化(ACE)免疫試劑盒
異配囊接霉生長(zhǎng)激受體抗體Human UBE4B 大鼠血管緊張?jiān)?aGT)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌腦腸肽抗體Human TXNDC4 大鼠血管緊張Ⅱ受體1(AT1R)抗體免疫試劑盒
栗酒裂殖酵母糖蛋白A33抗體Human UBAP1 大鼠血管緊張Ⅱ受體1(AT1R)免疫試劑盒
細(xì)鏈格孢腦腸肽抗體Human UBAC2 大鼠血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)免疫試劑盒
柑橘青霉菌胰高血糖樣肽-2抗體Human UBC 大鼠血管緊張Ⅰ(Ang-Ⅰ)免疫試劑盒
光帽鱗傘G蛋白偶聯(lián)受體GPR114蛋白抗體Human TXNDC5(Thioredoxin domain-containing protein 5) 大鼠血管緊張1-7(Ang1-7)免疫試劑盒
肉桂球形孢囊菌膠質(zhì)源性連接蛋白抗體Human UBASH3A 大鼠血管活性腸肽(VIP)免疫試劑盒
短小芽孢桿菌糖蛋白VI/六糖蛋白抗體Human TWF1 大鼠血管動(dòng)蛋白(AMOT)免疫試劑盒
大腸桿菌鳥還原1抗體Human TWIST1(Twist-related protein 1) 大鼠雄烯二(ASD)免疫試劑盒
巨獸芽孢桿菌G2期/S期應(yīng)答相關(guān)蛋白1抗體Human TTRAP 大鼠胸腺β-4(TMSB4X)免疫試劑盒
聚貪噬菌磷化GATA結(jié)合蛋白4抗體Human TWIST2 大鼠胸腺基質(zhì)淋巴生成(TSLP)免疫試劑盒
木霉Trichoderma│sp. 質(zhì)量規(guī)格：60-80目,氣相、液相色譜柱澳洲茄邊堿
耳炎短桿菌Brevibacterium│otitidis 質(zhì)量規(guī)格：80-100目,氣相、液相色譜柱澳洲茄堿
醋化醋桿菌Acetobacter│aceti 質(zhì)量規(guī)格：干燥劑用鹽小檗
海水藻保存液Ⅱ葡紫紅菇 2-溴-4-甲尿肌酐
紫紅曲霉 2-甲氧基對(duì)苯二尿
凍土毛霉原變型 1,8-二蒽醌尿氮
三隔鐮刀 2,3-二苯磺酰尿
芽孢桿屬 更韋尿微量白蛋白
釀酒酵母 3-溴溴芐檸檬合
雙孢菇 3,6-二噠-4-凝溶膠蛋白
異常威克漢姆酵母 2-巰基噻唑凝血抗凝血復(fù)合物
大腸埃希 2-溴-5-苯Ⅶ
球孢白僵 3,5-二-2-氟吡啶Ⅷ相關(guān)抗原
類布氏乳桿 2-氨基-3,4-二XIII A
礦泉水 鈣、鎂、、鈉、鍶、硒、偏硅 5-溴-2--4-(三氟甲基)吡啶牛血清白蛋白
栗疫 L-3-溴苯膀胱腫瘤抗原
巴氏醋桿 4-甲基噻唑-5-甲皮質(zhì)
釀酒酵母 2-溴環(huán)己酮皮質(zhì)酮;腎上腺酮
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