當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞組織染色>> 淡水藻保存液Ⅱ
貨號 | FS-X10191 |
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產(chǎn)品介紹:
用途: 含有福爾馬林、甘油等。 注意事項: 推薦用于淡水藻類的保存。此類保存液不能保色,如需保色,需用此保存液作用1-2天后轉(zhuǎn)入保色液中長期保存。 儲存條件:室溫,避光,12個月 |
中文名稱:淡水藻保存液Ⅱ
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100ml
貨號:FS-X10191
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
沉積物鹽坑微菌磷化神經(jīng)生長相關蛋白43抗體Human TSTA3(GDP-L-fucose synthase) 大鼠腺病(ADV)抗體(IgG)免疫試劑盒
Brenneria salicis 糖原合激-3β抗體Human TTC1 大鼠?;囸I(AG)免疫試劑盒
生活飲用水 總硬度、化物 抗粘附多肽抗體Human TSPAN31 大鼠纖維蛋白原γ鏈(Fgg)免疫試劑盒
凍膠假絲酵母腦膠質(zhì)瘤發(fā)病機制相關蛋白1抗體Human TTBK2 大鼠纖維蛋白原β鏈(Fgb/Ab1-181/Ab1-216/Ac1-581)免疫試劑盒
產(chǎn)朊假絲酵母神經(jīng)膜糖蛋白M6aHuman TSPAN33 大鼠纖維蛋白原α鏈(Fga)免疫試劑盒
尖鐮孢 葫蘆?;?/span>G蛋白偶聯(lián)受體101抗體Human TSPAN5 大鼠纖維蛋白原(Fb)免疫試劑盒
南方鹽單胞菌胰高血糖樣肽-1受體/GLP-1受體抗體Human TST 大鼠纖溶抑制因子/凝血激活的纖溶抑制物(TAFI)免疫試劑盒
灰樹花-1糖磷脂酰肌抗體Human TSPAN33 大鼠纖溶原激活物抑制因子(PAI)免疫試劑盒
膠孢磷化gp130抗體Human TSPAN31 大鼠纖溶原(Plg)免疫試劑盒
球孢白僵菌S轉(zhuǎn)移ζ1抗體Human TSPYL4 大鼠纖溶抗纖溶復合物(PAP)免疫試劑盒
解淀粉芽胞桿菌植物亞種甘-N-酰基轉(zhuǎn)移抗體Human TSPAN5 大鼠纖連蛋白(FN)免疫試劑盒
淺囊狀栓菌甘-N-?;D(zhuǎn)移樣1抗體Human TSN 大鼠周期D3(Cyclin-D3)免疫試劑盒
平菇 轉(zhuǎn)運蛋白G3PP抗體Human TSNAXIP1 大鼠周期D2(Cyclin-D2)免疫試劑盒
魯氏接合酵母磷化葡萄糖合成1抗體Human TSNAX 大鼠周期D1(Cyclin-D1)免疫試劑盒
珊瑚球菌糖原蛋白1Human TSP50 大鼠因子信號轉(zhuǎn)導抑制因子3(SOCS-3)免疫試劑盒
皺皮菌(可訂)生長因子受體結(jié)合蛋白2相關接頭蛋白抗體Human TSPAN1 大鼠因子信號轉(zhuǎn)導抑制因子1(SOCS-1)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格:60-80目,氣相、液相色譜柱D-四氫藥根堿
大腸桿菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:80-100目,氣相、液相色譜柱原阿片堿
杜鵑尾孢菌Cercospora│rhododendri Ferraris 質(zhì)量規(guī)格:2mm-3mm,干燥劑用去芹菜糖桔梗皂D
淡水藻保存液Ⅱ黑曲霉 乙松油酯嗜粒趨化因子
熱帶假絲酵母 姜黃油嗜性粒陽離子蛋白
球孢白僵 3-氨基-4-羥基-N-磺酰瘦
漆柄小孔 3--7-氮雜瘦受體
血痕韌革 N-CBZ-4-乙乙酯鼠泰澤病原體
梅林青霉 3-氟-5-(三氟甲基)-2-吡啶甲雙解絲蛋白1
鏈霉 3--5-三氟-2-羧雙氫睪酮
聚生殼 3--5(三氟甲氧)苯甲水痘帶狀皰疹病IgG抗體
葡萄座腔 2H-1,2,3-三氮唑-2-乙水通道蛋白1
粟酒裂殖酵母 4-溴-3-甲氧基苯甲水通道蛋白2
大腸埃希氏 2-溴-4-甲氧基苯甲水通道蛋白3
阿舒假囊酵母 N-甲基高哌水通道蛋白4
干草鞘氨單胞 反,反-2,4-庚二烯水通道蛋白5
杰丁畢赤酵母 2-氟烯水通道蛋白7
雞樅(雞) 5-甲基-3,4-二氫噻吩并[2,3-D]嘧啶-4-酮水通道蛋白9
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