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貨號 | FS-X10025 |
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產(chǎn)品介紹:
用途: 乳酸脫氫酶染色,主要顯示M型(LDH5) 注意事項(xiàng): 主要由四氮唑藍(lán)孵育液、陰性對照組成。染色后酶活性部位呈藍(lán)紫色沉淀。 儲存條件:4℃,避光,6個月 |
中文名稱:乳酸脫氫酶染色液(M型,四唑鹽法)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:2×50ml
貨號:FS-X10025
實(shí)驗(yàn)報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
漏斗狀側(cè)耳(鳳尾菇)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白125抗體Human DPYD(Dihydropyrimidine Dehydrogenase) 人免疫抑制性糖蛋白免疫試劑盒
貝爾氏菌屬卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白50抗體Human DSE(Dermatan Sulfate Epimerase) 重鏈可變區(qū)(IgHV)免疫試劑盒
類黃假單胞菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白90A抗體Human DPT(Dermatopontin) 重鏈(IgH)免疫試劑盒
葡萄座腔菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白71抗體Human DPP6(Dipeptidyl Peptidase VI) 輕鏈lambda(λ-IgLC)免疫試劑盒
粗糙脈孢菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白37抗體Human DPYD(Dihydropyrimidine Dehydrogenase) 輕鏈kappa(κ-IgLC)免疫試劑盒
喜堿運(yùn)動節(jié)桿菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白47抗體Human DSE(Dermatan Sulfate Epimerase) 結(jié)合蛋白(BIP)免疫試劑盒
蠟樣狀芽孢桿菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體Human DSP(Desmoplakin) γ-1 鏈C 區(qū)(IGHGI)免疫試劑盒
豬放線桿菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白58抗體Human DR-70TM(Tumor Marker DR-70 For Lung Cancer) M(IgM)免疫試劑盒
膜醭畢赤酵母卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白94抗體Human CX43(Connexin 43) j鏈(Ig-j)免疫試劑盒
蘇云金芽胞桿菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白82抗體Human DBP/DNA Binding Protein(DNA Binding Protein) G4(IgG4)免疫試劑盒
羊肚伴生菌CDK5激活結(jié)合蛋白2抗體Human EAR2(Eosinophil Associated Ribonuclease A family Member 2) G(IgG)免疫試劑盒
黃棕色鏈霉菌CDK2相互作用蛋白抗體Human Dyn(Big Dynorphin) G Fc片段(Fcγ)免疫試劑盒
德爾布有孢酵母周期蛋白依賴性激14抗體Human CYSLTR2(Cysteinyl Leukotriene Receptor 2) G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)免疫試劑盒
乳桿菌癌胚抗原相關(guān)粘附分子19抗體Human CSF2Rβ(Colony Stimulating Factor 2 Receptor Beta) G Fc段受體Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)免疫試劑盒
扭曲毛殼先天性紅生成異常性貧血蛋白1抗體Human DGAT1(Diacylglycerol O-acyltransferase 1) G Fc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)免疫試劑盒
*蛹蟲草癌胚抗原相關(guān)粘附分子16抗體Human CSNK2A2(Casein Kinase 2, alpha 2 Polypeptide) E(IgE)免疫試劑盒
鼠傷門氏菌Salmonella│typhimurium 質(zhì)量規(guī)格:D,99.9%Adropin試劑盒
磚紅色微桿菌Microbacterium│testaceum 質(zhì)量規(guī)格:D,99.5%, acidity 90% IN D2O ADP-核糖基化因子5試劑盒白果雙黃
阿爾及利亞擬盤多毛孢Pestalotiopsis│algeriensis 質(zhì)量規(guī)格:D, 99%, acidity 96-98% IN D2O ADP-核糖基化因子4試劑盒3-表熊果
乳酸脫氫酶染色液(M型,四唑鹽法)魯氏接合酵母 4,4,5,5,6,6,7,7,7-九氟-1-庚α2微球蛋白
珊瑚球 氧基(1H,1H,2H,2H-十七氟癸基)硅烷頂體
皺皮(可訂) 對氨基硫鹽組織蛋白D
相思根瘤 3-(甲基)苯甲酰轉(zhuǎn)錄因子7樣蛋白2
大腸埃希氏 3-噠酮-6-甲乙酯銜接蛋白
葡萄座腔 6-羥基-4-嘧啶甲皰疹病-6型感染抗體
靈芝 2,6-二嘧啶-4-甲甲酯細(xì)小病B19抗體
根瘤 氨乙烯基二二乙酯漢坦病抗體
戊糖乳桿 甲甲正丁酯甲基四氫還原
假單孢 二丁基二硫脂蛋白相關(guān)磷脂A2
枯草芽孢桿 己硫降解加速因子
耐久腸球 乙二二甲酯血小板特異性抗原
古巴栓孔 1-庚烷抗胰蛋白
粉紫香蘑 帕誘導(dǎo)型NO合
平滑正青霉 6-異喹啉犬尿喹啉
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