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貨號 | FS-X9893 |
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中文名稱:AO/EB雙熒光染色試劑盒
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100T
貨號:FS-X9893
產(chǎn)品介紹:
用途: 檢測細(xì)胞凋亡 注意事項(xiàng): 細(xì)胞死亡判斷的生物化學(xué)方法,橙(AO)能透過活細(xì)胞膜,嵌入細(xì)胞核DNA,使之發(fā)出明亮的綠色熒光。溴乙錠(EB)僅能透過胞膜受損的細(xì)胞,嵌入核DNA,發(fā)紅光?;罴?xì)胞呈綠色熒光,死細(xì)胞呈橙色熒光。試劑盒主要有AO染色液、EB染色液組成。 儲(chǔ)存條件:4℃,避光,6個(gè)月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
乳酒假絲酵母α1,4-N-乙酰葡糖轉(zhuǎn)移α4Gn-T抗體Human KTN1 小鼠微管蛋白β3(TUBB3)免疫試劑盒
南海區(qū)交替紅色桿菌芳香乙酰脫乙酰基抗體Human LAMR1/RPSA 小鼠網(wǎng)膜(omentin)免疫試劑盒
路氏腸桿菌芳香乙酰脫乙?;鶚拥鞍?/span>4抗體Human LANCL1 小鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌基乙二半脫氫磷泛酰巰基乙轉(zhuǎn)移抗體Human Langerin 小鼠脫氧膠原吡啶交聯(lián)(DPD)免疫試劑盒
融粘帚霉賴戊二還原抗體Human KRT81 小鼠脫氫表雄硫酯(DHEA-S)免疫試劑盒
F56(蘑菇)錨蛋白重復(fù)域6抗體Human KRT80 小鼠脫氫表雄(DHEA)免疫試劑盒
黃薄芝精2抗體Human KRT6B 小鼠褪黑(MT)免疫試劑盒
食芽胞桿菌固還原家族1成員C3抗體Human KPNA5 小鼠突觸融合蛋白2(STX2)免疫試劑盒
大腸埃希菌促腎上腺皮質(zhì)激受體Human KPNA4(Karyopherin subunit alpha-4) 小鼠突觸融合蛋白1A(STX1A)免疫試劑盒
肉色曲霉褐黑相關(guān)蛋白ART抗體Human KPNA6(Karyopherin subunit alpha-6) 小鼠透明質(zhì)結(jié)合蛋白(HABP)免疫試劑盒
中溫富鹽菌腎上腺皮質(zhì)線粒體鐵氧還蛋白抗體Human KPTN 小鼠透明質(zhì)(HA)免疫試劑盒
深褐褶菌Allgrove綜合征相關(guān)蛋白抗體Human KRAP/SSFA2 小鼠銅藍(lán)蛋白(CP/CER)免疫試劑盒
中國臺(tái)灣根霉腺相關(guān)病5 VP1抗體Human KRAS(GTPase KRas) 小鼠同型半胱(Hcy)免疫試劑盒
禽腺病Ⅶ型脂肪脫氫抗體Human KLHDC5 小鼠鐵調(diào)(Hepc)免疫試劑盒
木賊鐮孢抗利尿激1A抗體Human KRR1 小鼠鐵蛋白(FE)免疫試劑盒
富養(yǎng)羅爾斯通氏菌抗利尿激受體1B抗體Human KRI1 小鼠天門冬基轉(zhuǎn)移(AST)免疫試劑盒
: AS3.2835資源名稱: 串珠鐮孢 質(zhì)量規(guī)格:BR白三烯C4試劑盒8-香葉草氧基補(bǔ)骨脂
杉木假單胞菌Pseudomonas│cunninghamiae 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR白三烯B4試劑盒熊果乙酯
堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌Bacillus│firmus 質(zhì)量規(guī)格:分子生物學(xué)級白介增強(qiáng)子結(jié)合因子2試劑盒細(xì)辛
AO/EB雙熒光染色試劑盒皮傘 2-(4-溴基)過氧化物
波那雷恩沙門氏 L-2,4-二苯脂蛋白相關(guān)磷脂A2
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿 辛甲酯纖溶原激活物抑制因子2
雅致小克銀漢霉 二二甲,異構(gòu)體混合物基質(zhì)金屬蛋白2
蟬花1-9 2,2'-氧二乙內(nèi)皮分泌蛋白 SCUBE2
枯草芽胞桿 苯黑腺病
氧化微桿 4-芐基哌鹽鹽副流感病IgM抗體
淤泥大洋芽孢桿 谷維呼吸道合胞病
釀酒酵母 N,N′-乙撐雙硬脂酰膠原蛋白三螺旋重復(fù)包含蛋白1
毛木耳(紫木耳、黃背木耳) 4-氨基-3,5-二氟苯晶狀體球蛋白αB
金針菇 鹽多奈哌齊維生K
穿孔假單胞 (3S,4R)-4-(4-氟苯基)-3-羥甲基-1-甲基HLAⅡ類組織相容性抗原DP鏈
嗜淀粉乳桿 亞甲基氨基乙HLAⅡ類組織相容性抗原DQ鏈
枯草芽孢桿 16,17-環(huán)氧脫氧核糖核13
鏈格孢 N,N-二甲基-3-日本腦炎病IgM抗體
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