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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 結(jié)晶紫染色液
貨號(hào) | FS-X9798 |
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產(chǎn)品介紹:
結(jié)晶紫染色液是一種組織或細(xì)胞染色時(shí)常用的可以把細(xì)胞核染成深紫色的染色液。結(jié)晶紫是一種堿性染料,可以和細(xì)胞核中的DNA 結(jié)合,從而產(chǎn)生細(xì)胞核染色。本產(chǎn)品至少可以染色200 個(gè)樣品。 組成成份: 5×結(jié)晶紫染色液 20mL 稀釋液 80mL 注意事項(xiàng): 需自備4%多聚。如果需要脫水、透明和封片處理,還需自備二甲苯,中性樹膠或其它封片劑。如果樣品是石蠟切片,需自備70%和90%乙醇,無水乙醇以及二甲苯。 第一次使用本試劑盒時(shí)建議先取1-2 個(gè)樣品做預(yù)實(shí)驗(yàn)。 結(jié)晶紫對(duì)人體有害,請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù),為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 儲(chǔ)存:RT避光,有效期一年。 |
中文名稱:結(jié)晶紫染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100ml
貨號(hào):FS-X9798
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
干擾α(IFNα)英文名:IFNα 半胱蛋白抑制劑6抗體包裝5g
肝脂(LIPC)英文名:LIPC 碳酐相關(guān)蛋白/腦蛋白10抗體包裝1g
肝再生擴(kuò)展生長(zhǎng)因子(GFER)英文名:GFER 白介-18受體α鏈抗體包裝5g
肝(HPA)英文名:HPA 轉(zhuǎn)錄阻抑蛋白CTCF抗體包裝1g
肝結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子(HBEGF)英文名:HBEGF T淋巴CD1抗體包裝25g
肝輔因子Ⅱ(HCⅡ)英文名:HCⅡ 磷化周期檢測(cè)點(diǎn)激2抗體包裝5g
肝腎骨堿性磷(ALPL)英文名:ALPL 網(wǎng)格蛋白重鏈抗體包裝1g
肝配蛋白B受體3(EPHB3)英文名:EPHB3 透明質(zhì)介導(dǎo)游走受體抗體包裝100g
肝配蛋白B2(EFNB2)英文名:EFNB2 2號(hào)染色體開放閱讀框24抗體包裝1g
肝癌源性生長(zhǎng)因子(HDGF)英文名:HDGF 2號(hào)染色體開放閱讀框60抗體包裝250mg
肝X受體α(LXRα)英文名:LXRα 磷化周期依賴性激7抗體包裝25g
甘油醛-3-磷脫氫(GAPDH)英文名:GAPDH 磷化周期依賴性激9抗體包裝5g
甘露糖受體C2(MRC2)英文名:MRC2 磷化周期檢測(cè)點(diǎn)激1抗體包裝5g
甘露糖受體C1(MRC1)英文名:MRC1 磷化周期檢測(cè)點(diǎn)激1抗體包裝1g
甘露糖結(jié)合蛋白(MBL)英文名:MBL 磷化抑癌基因p16抗體包裝250mg
香菇Lentinula│edodes 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%,培養(yǎng)級(jí)載脂蛋白B48試劑盒原七葉皂元;Protoaescigen
植物乳桿菌Lactobacillus│plantarum 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品載脂蛋白B100試劑盒鹽;EMetine Hydroc
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,USP31,BR,可用于培養(yǎng)載脂蛋白A5試劑盒乙氧基血根堿;Ethoxysanguin
結(jié)晶紫染色液大腸埃希 阿卡他定白抗原B27
巨大芽孢桿 4-咪唑類白抗原B1502
地衣芽胞桿 3-苯基芐基溴抗RNA聚合III抗體
謝瓦曲霉 Nα-Fmoc-Nε-生物-L-賴還原型輔Ⅰ
草假單胞 Y-27632信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子4
弗氏鏈霉 [4-(反-4-N-基環(huán)己基)苯基]甲型肝炎病IgM抗體
木菇屬 1-Boc-3-戊型肝炎病IgM抗體
瓜果腐霉 六硝基鈷(III)鈉幽門螺桿抗體
釀酒酵母 四苯基卟啉鎂幽門螺桿抗原
優(yōu)美氈被 Cy5-N-羥基琥珀酰亞酯黃熱病抗原
黃色孢鏈霉 Cy5黃熱病IgG抗體
克羅諾桿屬 N-BOC-4-氧代-3-吡咯烷甲乙酯凋亡相關(guān)蛋白TFAR19
嗜熱側(cè)孢霉 鹽噻加賓抗鼠抗體
羅倫隱球酵母 5-溴-1,3-二氟-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苯流行性腦膜炎球抗原
開菲爾乳桿 二二羰基雙(三苯基膦)釕(II)圍脂滴蛋白
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