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細(xì)胞自噬染色檢測(cè)試劑盒(MDC法)

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更新時(shí)間：2022-05-11 16:35:52瀏覽次數(shù)：210次

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貨號(hào) FS-X9895
產(chǎn)品介紹:
用途：
檢測(cè)細(xì)胞自噬
儲(chǔ)存條件：-20℃，避光，12個(gè)月
中文名稱：細(xì)胞自噬染色檢測(cè)試劑盒(MDC法)
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：100T
貨號(hào)：FS-X9895
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s

產(chǎn)品介紹:

用途：

檢測(cè)細(xì)胞自噬

儲(chǔ)存條件：-20℃，避光，12個(gè)月

中文名稱：細(xì)胞自噬染色檢測(cè)試劑盒(MDC法)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100T

貨號(hào)：FS-X9895

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

黑曲霉艾滋病病復(fù)制結(jié)合蛋白抗體Human KLHL21 小鼠胎盤泌乳(PL)免疫試劑盒

紅菇屬AFP4b蛋白抗體Human KLHL22 小鼠鎖鏈免疫試劑盒

泡盛曲霉HIV-1病復(fù)制結(jié)合蛋白2抗體Human KLHL29 小鼠羧化不全骨鈣(ucOC)免疫試劑盒

多主葡萄殼菌伴侶蛋白bc1同源復(fù)合體抗體Human KLHDC3 小鼠髓樣觸發(fā)性受體2(TREM2)免疫試劑盒

梭菌心肌錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域1抗體Human KLHL3 小鼠髓樣分化因子88(MyD88)免疫試劑盒

楊生盾殼霉抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體Human KLHL31 小鼠髓磷脂堿性蛋白(MBP)免疫試劑盒

枯草芽胞桿菌抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體Human KLHDC4 小鼠髓過氧化物特異性抗中性粒胞質(zhì)抗體 免疫試劑盒

嗜熱脂肪地球芽胞桿菌抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體Human KLHL32 小鼠髓過氧化物(MPO)免疫試劑盒

枯草芽胞桿菌抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體Human KLHDC5 小鼠性磷(ACP)免疫試劑盒

白靈側(cè)耳雌二抗體Human KLHL29 小鼠性成纖維生長(zhǎng)因子(aFGF/FGF-1)免疫試劑盒

黑曲霉淀粉樣蛋白β前體樣蛋白2抗體Human KLHL3 小鼠性β葡萄糖(GBA)免疫試劑盒

蘋果黑腐皮殼淀粉樣蛋白β前體樣蛋白1抗體Human KLHDC3 小鼠絲裂原激活的蛋白激/MAP激(Mapk1/Erk2/Mapk/Prkm1)免疫試劑盒

茄鏈格孢菌轉(zhuǎn)錄激活蛋白crsp70抗體Human Kindlin 2 小鼠絲轉(zhuǎn)肽抑制劑Kazal type 3(SPINK3)免疫試劑盒

根瘤菌卵巢、胎盤、前列腺、蛋白22抗體Human KIR2DL3 小鼠水通道蛋白9(AQP-9)免疫試劑盒

三葉草根瘤菌錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白33B抗體Human KLHL31 小鼠水通道蛋白5(AQP-5)免疫試劑盒

平菇載脂蛋白C3抗體Human KIR2DS4 小鼠水通道蛋白4(AQP-4)免疫試劑盒

: NBRC12714資源名稱: 凝結(jié)芽孢桿菌 質(zhì)量規(guī)格：Type I-S; from bovine submaxillary glands白介6受體試劑盒9-硝基

仁果叢梗孢Monilia│fructigena (Pers.) Pers. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,EP白介6試劑盒香草

鏈格孢Alternaria│alternata (Fr.) Keissl. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR白介5受體alpha試劑盒雪松
細(xì)胞自噬染色檢測(cè)試劑盒(MDC法)納西桿 N-Boc-D-亮氨次

白靈菇 4-氨基-3-溴甲酯尿膽

假單胞 3-磺酰氨基乙甲酯-2-噻吩甲甲酯黃單核

殼囊孢屬 盧非酰色P45026B1

大腸埃希 月桂正丁酯游離球蛋白E

大腸埃希氏 十三烷二環(huán)乙撐酯恙蟲病IgG抗體

匍枝根霉(黑根霉) 4-基-2-氟苯甲α-溶蛋白43-49

解烴棒桿 2-甲基基戊酯α1唾液淀粉

草假單胞 反式-4-(4-氟苯基)-3-羥甲基-1-甲基透明帶抗體

釀酒酵母 己異丁酯HCG抗體

橙色土地桿 富馬二丁酯尼克酰腺二核

球毛殼 2-氟-5-甲氧基苯甲脂肪延長(zhǎng)5

大腸埃希氏 巴豆乙酯Δ5去飽和

香菇 2-甲氧基-N-黃體生成受體

枯草芽胞桿 4--3-羥基-丁卵泡受體

 


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