綠藻保色液Ⅰ-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10193

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：綠藻保色液Ⅰ

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

貨號(hào)：FS-X10193

產(chǎn)品介紹:

用途：

用于綠藻的保色保存。

注意事項(xiàng)：

主要由乳酸、甘油、酚、醋酸銅等組成。

儲(chǔ)存條件：室溫，避光，12個(gè)月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

黃褐環(huán)銹傘谷酰1抗體Human TRPC4 大鼠凋亡調(diào)節(jié)因子BAX(BAX)免疫試劑盒

約氏黃桿菌G蛋白偶聯(lián)受體GPR161蛋白抗體Human TRPA1(Transient receptor potential cation channel subfamily A member 1) 大鼠硒蛋白P(SEPP1)免疫試劑盒

榛色假單胞菌G蛋白偶聯(lián)受體GPR180蛋白抗體Human TSFM 大鼠戊糖(Pentosidine)免疫試劑盒

大腸埃希氏桿菌G蛋白通路抑制物蛋白2抗體Human TSG101(Tumor susceptibility gene 101 protein) 大鼠五聚3(PTX3)免疫試劑盒

埃里希青霉G蛋白偶聯(lián)受體GPR177蛋白抗體Human TRPM6 大鼠胃泌調(diào)節(jié)免疫試劑盒

Chitinophaga sancti G蛋白偶聯(lián)受體GPR89A蛋白抗體Human TSGA10 大鼠胃泌(Gastrin)免疫試劑盒

雙孢蘑菇G蛋白偶聯(lián)受體GPRSP2蛋白抗體Human PDE10A(cAMP and cAMP-inhibited cGMP 3′,5′-cyclic phosphodiesterase 10A) 大鼠胃動(dòng)受體(MTLR)免疫試劑盒

節(jié)桿菌屬G蛋白偶聯(lián)受體GPRC5C蛋白抗體Human TSGA13 大鼠胃動(dòng)(MTL)免疫試劑盒

秦氏蜜環(huán)菌G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合蛋白α14/Gα 14 抗體Human TRPM8(Transient receptor potential cation channel subfamily M member 8) 大鼠胃蛋白(PG)免疫試劑盒

賈巴爾普爾毛殼G蛋白β樣蛋白抗體Human TRPS1 大鼠維生K1(VK1)免疫試劑盒

哈茨木霉G蛋白β5/Gβ 5 抗體Human TRPT1 大鼠維生E(VE)免疫試劑盒

炭黑曲霉G蛋白γ13/Gγ13 抗體Human TRMT5 大鼠維生D結(jié)合蛋白(DBP)免疫試劑盒

海洋桿菌G蛋白γ5/Gγ5 抗體Human TSHZ3 大鼠維生D3(VD3)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌G蛋白γ 1/Gγ 1 抗體Human TRMT6 大鼠維生D2(VD2)免疫試劑盒

瑟氏泰勒蟲(成縣株）鳥核結(jié)合蛋白2抗體Human TRNAU1AP/SECP43 大鼠維生D(VD)免疫試劑盒

秦氏蜜環(huán)菌鳥核結(jié)合蛋白3樣蛋白抗體Human TNFRSF6B(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6B) 大鼠維生C(VC)免疫試劑盒

: ATCC11758資源名稱: 草分枝桿菌質(zhì)量規(guī)格：40-60目,氣相、液相色譜柱絞股藍(lán)皂XLIX

木賊鐮刀菌Gibberella│intricans Wollenw. 質(zhì)量規(guī)格：60-80目,氣相、液相色譜柱棕櫚

大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：80-100目,氣相、液相色譜柱連翹酯B
綠藻保色液Ⅰ稻麥穗孢霉草鋅糖化血紅蛋白A1c

無花果曲霉 L-2-溴苯糖化血清蛋白

芹側(cè)耳（杏鮑菇） 1-(3-氟-4-基)乙酮糖皮質(zhì)

傳染性法氏囊病病 3--4--1-磺酰糖皮質(zhì)類固受體

金太陽杏葉細(xì)性穿孔病 4--3-甲糖原合成

青灰紅菇 N-4-苯甘糖原合成激

金黃殼囊孢 3-甲基嗎啉糖原磷化

大腸埃希氏 3-肼基吡啶天門冬

木糖葡萄球 5-氨基-2-甲酯谷草轉(zhuǎn)氨;天門冬氨基轉(zhuǎn)移

木霉 2-嗎啉基鐵蛋白

構(gòu)巢曲霉 4-叔丁基芐鐵調(diào)

孢小克銀漢霉輪生變種 2-甲甲酯同型半胱

墳?zāi)构?jié)桿 4-氧代酮鹽鹽銅鋅超氧化物歧化1

賴芽孢桿 5-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉鹽鹽酮體

三葉草根瘤 4-(9H-咔唑-9-基)苯透明帶結(jié)合蛋白3
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)