伊紅染液-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9800

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

中文名稱：伊紅染液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

貨號：FS-X9800

產(chǎn)品介紹:

伊紅為一種紅色的酸性染料，可將細胞質(zhì)和細胞間質(zhì)染為粉紅色。水溶性伊紅組織學(xué)上用于上皮細胞、肌肉纖維和細胞漿染色。微生物學(xué)實驗中，用于鑒別產(chǎn)酸性細菌的一種培養(yǎng)基添加劑。

染色的時間長短需依據(jù)：染劑對細胞、組織的染色作用，室溫條件，涂片厚薄等進行調(diào)節(jié)。所以在染色時必須使用顯微鏡觀察染色程度以利掌握時間。

操作方法

1. 涂片放空氣中自然干燥，甲醇固定5 分鐘，自來水小水流洗去固定液。

2. 滴加伊紅染液染色2 分鐘，流水洗去多余染液，濾紙吸干水分，鏡檢。

3. 鏡檢結(jié)果：胞漿呈紅色，紅細胞呈桔紅色，其它成分呈深淺不同紅色。

儲存：室溫避光，有效期一年。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

分泌型卷曲相關(guān)蛋白4(SFRP4)英文名：SFRP4 分裂周期蛋白7抗體包裝500mg

分泌型卷曲相關(guān)蛋白2(SFRP2)英文名：SFRP2 磷化分裂周期蛋白25抗體包裝1g

分泌型卷曲相關(guān)蛋白1(SFRP1)英文名：SFRP1 分裂周期蛋白25B抗體包裝5g

分泌粒蛋白Ⅱ(SCG2)英文名：SCG2 磷化CD244抗體包裝250g

肺部激活調(diào)節(jié)趨化因子(PARC)英文名：PARC 神經(jīng)元電壓門控鈣通道γ3/L-type Ca++CP γ3抗體包裝50g

腓骨蛋白7(FBLN7)英文名：FBLN7 3號染色體開放閱讀框25抗體包裝1g

肥胖抑制(OB)英文名：OB 轉(zhuǎn)錄激活因子MYB抗體包裝1g

肥大細胞類糜蛋白1(CMA1)英文名：CMA1 陽離子通道相關(guān)蛋白1抗體包裝1g

防御β2(DEFβ2)英文名：DEFβ2 1號染色體開放閱讀框222抗體包裝1g

防御β1(DEFβ1)英文名：DEFβ1 2號染色體開放閱讀框15抗體包裝1g

防御α5(DEFα5)英文名：DEFα5 骨架相關(guān)蛋白4抗體包裝25g

防御α1(DEFα1)英文名：DEFα1 肌肽二肽1抗體包裝5g

芳香烴受體核轉(zhuǎn)位因子(ARNT)英文名：ARNT 性線粒體肌激抗體包裝10g

芳香烴受體(AhR)英文名：AhR 碳酐相關(guān)蛋白8抗體包裝25g

泛結(jié)合E2A(UBE2A)英文名：UBE2A 鈣通道電壓依賴性β1蛋白抗體包裝5g

大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：≥930μg/mg,BR,可用于培養(yǎng)載脂蛋白A1試劑盒8-氧黃連堿 ;

: Vi-1,8382資源名稱: 傷門氏菌質(zhì)量規(guī)格：效價測定運狀腺蛋白/前白蛋白試劑盒異澤蘭黃;Eupatilin

大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：純度大于97%含量84.0-102%,USP30孕烯試劑盒異橙黃;Isosinensetin；3
伊紅染液停乳鏈球 1-Boc-2-基吡咯烷絲蛋白抑制因子1

黑曲霉 5-溴-2-甲氧基苯甲松弛肽2;松弛2

黑曲霉變種 N-乙基琥珀酰亞UDP葡糖基轉(zhuǎn)移1家族多肽A1

葡枝根霉 2-甲氧羰基-5-苯磺酰登革熱病NS1抗原

玫瑰綠色鏈霉 1,2,3,4-四氫異喹啉-6-金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白13

根瘤 9-癸烯C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白9

熒光假單胞 4,8-雙(5-(2-丁基辛基)噻吩-2-基)苯并[1,2-b:4,5-b']二噻吩抗人類缺陷病抗體

金黃色葡萄球 4-氨基-5-溴嘧啶硫肝糖蛋白

紅酵母屬 3-溴鄰苯二酚纖維蛋白原抗體

雙歧雙歧桿 2-氨基-5-羥基嘧啶N末端B型鈉尿肽

土曲霉 3-溴-4-羥基輔Q10

膜醭畢赤酵母 4-溴-3-羥基酮

球毛殼 6-溴-7-氮雜心臟肌球蛋白結(jié)合蛋白C

Bacillus tequilensis 油泛交叉反應(yīng)蛋白

大腸桿三甘單丁可溶性白抗原-E
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)