死細胞核染料(碘化丙啶)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9820

英文名稱：PI

產品規(guī)格：20mg|5mg|10mg

貨號：FS-X9820

產品介紹:

碘化丙啶與DNA 結合，它不具備序列選擇性，每4~5 個堿基對進行插入。PI 也可以與RNA 結合，因此在RNA 核酸治療中，需要區(qū)別PI 是與DNA 還是RNA 結合，但PI 一旦與核酸結合，其熒光增強20~30 倍，熒光激發(fā)向紅色大光位移大約30~40nm，熒光發(fā)射向藍光大位移大約15nm。雖然其摩爾吸光系數比較低，但是PI 具有一個足夠打的斯托克斯位移（stokes shift），可以通過合適的光學濾光器來檢測到其標記的核DNA 或者標記結合的抗體。PI 適用于熒光顯微鏡、激光共聚焦掃描顯微鏡、流式細胞儀以及熒光光度法。

PI 不具備膜滲透性，通常用于多色熒光技術中區(qū)分死細胞群體。PI 的復染操作，可以涉及到多種實驗應用，如細胞學標記技術、直接或間接地抗體熒光檢測、mRNA 表達原位雜交以及特定的細胞結構熒光試劑染色。

儲存：-20℃，避光，有效期12個月。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

RAS癌基因家族成員RAB5A(RAB5A)英文名：RAB5A 白介1-β轉化樣凋亡蛋白6抗體包裝500g

P-選擇糖蛋白配體1(PSGL1)英文名：PSGL1 白介1-β轉化樣凋亡蛋白6抗體包裝5g

P選擇(SELP)英文名：SELP 表面趨化因子受體4抗體包裝5MG

Podocan蛋白(PODN)英文名：PODN CD19抗體包裝1g

PHD指蛋白8(PHF8)英文名：PHF8 環(huán)氧合2/前列腺內過氧化物合成2抗體包裝250mg

Persephin蛋白(PSPN)英文名：PSPN 白分化抗原CD2AP抗體包裝25g

Osterix蛋白(OSX)英文名：OSX CD3/CD3-ε 抗體包裝5g

N-乙酰轉移1(NAT1)英文名：NAT1 軟骨糖蛋白39抗體包裝25g

N-乙酰半乳糖胺α(NAGα)英文名：NAGα 癌胚抗原抗體包裝5g

N-乙酰β-D-基葡萄糖(NAGase)英文名：NAGase 癌胚抗原相關粘附分子8抗體包裝1g

N-型電壓依賴鈣離子通道α1B亞基(CACNα1B)英文名：CACNα1B C型鈉尿肽抗體包裝5g

N-基-D-天氡離子能谷受體2A(GRIN2A)英文名：GRIN2A 組織蛋白K抗體包裝1g

Nodal同源物(NODAL)英文名：NODAL 組織蛋白D抗體包裝5g

NADH脫氫1(ND1)英文名：ND1 組織蛋白H抗體包裝25g

Misato同源物1(MSTO1)英文名：MSTO1 磷化鈣/鈣調依賴蛋白激2α抗體包裝5g

需鹽桿菌Salegentibacter│sp. 質量規(guī)格：>99%,BR,可用于培養(yǎng)異腎上腺試劑盒葉綠;Phytol

小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質量規(guī)格：HPLC>99%,標準品乙型肝炎病前S2抗原試劑盒異虎耳草 ;Isopimpinelli

廈門海旋菌Thalassospira│xiamenensis 質量規(guī)格：>99%,BR,可用于培養(yǎng)乙型肝炎病前S2抗體試劑盒一枝蒿 ;Bullatine A
死細胞核染料(碘化丙啶)弗雷德里克斯堡假單胞 4-羧基-3-氟苯甘脫氫

枯草芽胞桿氮化鈣 (metals basis)神經降壓

芽胞桿鋁鑭盤, 10x10x1mm, polished one side, 100 orientatio寡樹突膠質糖蛋白抗體

穴形節(jié)皮十二三鈦鋁超廣譜β-內酰

植物乳桿 2,2-二氟-1,3-苯并二惡茂-4-甲三葉因子1

盤孢屬 N-苯磺酰N-羥乙酰神經

冠突曲霉 3,4-二氫異喹啉-1(2H)-酮布魯氏桿

沙生梭孢殼 5-甲酰基鼠疫抗原

葡萄汁有孢漢遜酵母 DL-N-Boc-烯基甘神經降壓前體

牛舌、肝色牛排 2,6-二氟苯肼13(S)-HODE

白地霉 4-苯基乙炔基鄰苯二甲酐髓鞘少突膠質糖蛋白

谷棒桿 (3R,4R)-3,4-二甲基-4-(3-羥基苯基)半胱蛋白12

黃桿 [1,3-二氫-1,3-雙(2,4,6-三基)-2H-咪唑-2-亞基](2-噻吩基亞甲基)(三NLRP3炎癥小體

腸炎沙門氏 (S)-2-氨甲基-1-Cbz-吡咯烷解脲支原體IgM抗體

栗疫 5-溴-3-吡啶-2-羧Traf2結合蛋白

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