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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> DiOC6(3)碘化物
貨號(hào) | FS-X9803 |
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產(chǎn)品介紹:
DiOC6(3),是一種膜可透性,綠色熒光的親脂性染料。,低濃度下可選擇性染色活細(xì)胞的線粒體;高濃度下,可以用于染色其他細(xì)胞器內(nèi)膜,如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。對(duì)于固定的細(xì)胞來說,DiOC6(3)可以染色胞內(nèi)膜。DiOC6(3) (excitation, 484 nm; emission, 501nm) 化學(xué)名稱:DiOC6(3) 分子式:C29H37IN2O2 分子量:572.5:53213-82-4 溶解性:溶于DMSO 儲(chǔ)存:-20℃,避光,有效期一年。 |
中文名稱:DiOC6(3)碘化物
英文名稱:3,3’-Dihexyloxacarbocyanine iodide
產(chǎn)品規(guī)格:10mg
貨號(hào):FS-X9803
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
毒蕈堿型受體M3(CHRM3)英文名:CHRM3 毛細(xì)管形態(tài)發(fā)生蛋白1抗體包裝100g
毒蕈堿型受體M2(CHRM2)英文名:CHRM2 肌鈣集蛋白/收鈣抗體包裝25g
凋亡蛋白激活因子1(APAF1)英文名:APAF1 鈣結(jié)合蛋白樣39抗體包裝5g
淀粉樣前體蛋白(APP)英文名:APP 癌胚抗原相關(guān)粘附分子3抗體包裝1ml
淀粉樣蛋白β前體樣蛋白1(APLP1)英文名:APLP1 20號(hào)染色體開放閱讀框31抗體包裝1g
淀粉樣蛋白β1-42(Aβ1-42)英文名:Aβ1-42 成簇相關(guān)蛋白1抗體包裝25g
淀粉樣蛋白β1-40(Aβ1-40)英文名:Aβ1-40 腫瘤/抗原2抗體包裝5g
碘腺原脫碘Ⅲ(DIO3)英文名:DIO3 腫瘤/抗原1B包裝1g
碘腺原脫碘Ⅱ(DIO2)英文名:DIO2 皮膚T淋巴瘤相關(guān)抗原5抗體(腦膜瘤表達(dá)抗原6)包裝5g
抵抗(RETN)英文名:RETN 腫瘤/抗原3抗體包裝10mg
低氧誘導(dǎo)因子2α(HIF2α)英文名:HIF2α 腦多巴神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗體包裝1g
低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF1α)英文名:HIF1α 鈣依賴分泌激活蛋白2/自閉癥的相關(guān)蛋白抗體包裝5g
低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1(LRP1)英文名:LRP1 膽囊收縮A受體抗體包裝100mg
低密度脂蛋白受體銜接蛋白1(LDLRAP1)英文名:LDLRAP1 小腦肽3抗體包裝1g
低密度脂蛋白受體(LDLR)英文名:LDLR 周期依賴性激樣5抗體包裝1g
根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,醋鹽形式遠(yuǎn)端上游元件結(jié)合蛋白1試劑盒鹽伊立替康;Irinotecan hy
: ivcas7.00510資源名稱: 蘇云金芽孢桿菌 質(zhì)量規(guī)格:>920U/MG,USP原纖維蛋白-1試劑盒氧化前胡;Oxypeucedanin
Z20259資源名稱: 嗜熱鏈球菌 質(zhì)量規(guī)格:>97%原鈣黏1試劑盒羊藿次I;Icarisid I
DiOC6(3)碘化物Paraconiothyrium sp. 4-乙乙酯植
火木層孔 六鈷鋅植
異常漢遜酵母 鹽奧洛他定癸甘油酯-1
鍺栓孔 (淡黃褐栓) 1-(N-Boc-氨乙基)哌40S核糖體蛋白S3
德氏乳桿保加利亞亞種 4-脲脊髓灰質(zhì)炎病IgG抗體
脫硫弧脫硫亞種(脫硫微螺、脫硫螺、脫硫桿、脫硫芽孢弧、脫硫?。?/span> 乙二四乙銅鈉二水合物脊髓灰質(zhì)炎病IgM抗體
松針散斑殼 苯基胍碳鹽可溶性CD28分子
生假絲酵母 5-甲基-2-呋喃基質(zhì)金屬蛋白14
腫痂鏈霉 2,2-二甲基-3-羥基甲酯狀瘤病16抗體
光柄滑銹傘 2-甲氧基-4-甲基嘧啶狀瘤病18抗體
遼寧類芽孢桿 4-巴豆抗Sa抗體
蟻巢傘屬 羥鹽球蛋白G Fc段受體Ⅰ
大腸埃希 球蛋白G Fc段受體Ⅱ
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿 三乙酰酮鋁性休克綜合征1
釀酒酵母 3,5-二溴吡啶-4-甲色P4502D6
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