鈣黃綠素AM-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9823

英文名稱：Calcein,AM

產(chǎn)品規(guī)格：10μg

貨號(hào)：FS-X9823

產(chǎn)品介紹:

鈣黃綠素AM，是一種應(yīng)用廣泛的綠色熒光細(xì)胞標(biāo)記物。鈣黃綠素AM具有膜透性，共孵育時(shí)可以傳過細(xì)胞，其本身不具有熒光信號(hào)，但在胞內(nèi)被酯酶水解后，生成具有熒光信號(hào)的鈣黃綠素。

在健康的活細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中，鈣黃綠素可以保持高負(fù)電荷狀態(tài)。由于其對(duì)細(xì)胞的毒性小，鈣黃綠素AM 已經(jīng)被廣泛用于研究細(xì)胞膜的完整性和長(zhǎng)期示蹤觀察以及活細(xì)胞計(jì)數(shù)。

：148504-34-1

分子式：C46H46N2O23

分子量：994.86

儲(chǔ)存：-20℃，避光，有效期12個(gè)月

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

D-二聚體(D2D)英文名：D2D 原癌蛋白CBL2抗體包裝5g

D-多巴色變位(DDT)英文名：DDT 信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白α抗體包裝1g

DNA修復(fù)蛋白R(shí)AD50(RAD50)英文名：RAD50 信號(hào)淋巴活化分子CD150抗體包裝5g

DNA損傷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子3(DDIT3)英文名：DDIT3 巨噬炎性蛋白16抗體包裝10g

DNAⅠ樣蛋白3(DNASE1L3)英文名：DNASE1L3 果蠅CG6856-PA抗體包裝5g

DNA基轉(zhuǎn)移3B(DNMT3B)英文名：DNMT3B 色c氧化COX7A2抗體包裝1g

DNA基轉(zhuǎn)移1(DNMT1)英文名：DNMT1 剪切和多聚腺化特異性因子4抗體包裝25g

DNA激活蛋白激催化亞基肽(PRKDC)英文名：PRKDC 組織蛋白E抗體包裝5g

Discs大同源物4(DLG4)英文名：DLG4 緊密連接蛋白5抗體包裝25g

Discoidin域受體家族成員1(DDR1)英文名：DDR1 分化周期CDC42相互作用蛋白4抗體包裝5g

Dickkopf相關(guān)蛋白4(DKK4)英文名：DKK4 周期蛋白依賴性激樣3抗體包裝100ml

Dickkopf相關(guān)蛋白1(DKK1)英文名：DKK1 殺菌肽/天蠶抗菌肽單克抗體包裝25ml

C組著色性干皮病偶聯(lián)因子(XPC)英文名：XPC 第十七號(hào)染色體開放閱讀框87抗體包裝1g

C-型鈉尿肽(CNP)英文名：CNP 降鈣受體抗體包裝25g

C-肽(C-Peptide)英文名：C-Peptide 補(bǔ)體C2a鏈多肽抗體包裝5g

蠟樣芽孢桿菌Bacillus│cereus 質(zhì)量規(guī)格：purity>97%,BR乙型肝炎病e抗原試劑盒野鷲尾;Lridin

: ivcas7.00265資源名稱: 球形賴芽孢桿菌質(zhì)量規(guī)格：>98%,單醋鹽乙型肝炎病e抗體試劑盒芫花;Genkwanin

百日咳博德特氏菌Bordetella│pertussis 質(zhì)量規(guī)格：>99.0%,BR乙型肝炎表面抗原試劑盒3－乙酰基乳香 ;alpha-bosw
鈣黃綠素AM樟疫霉 4--3,5-二氟載脂蛋白A5

擬康寧木霉 3-溴-6,9-二苯基-9H-咔唑煙酰

擬青霉 3-氨基-N-CBZ-吡咯烷鹽鹽結(jié)核桿IgM抗體

嗜麥芽寡養(yǎng)單胞 Cbz-1-氨基-1-環(huán)基線粒體呼吸鏈復(fù)合物I

蓋氏海桿狀 5-溴乙?；?2-羥基苯甲N-甲基-D-天門冬（NMDA）受體A1亞單位NR4

帚狀曲霉 7-基啉15脂加氧1

大腸埃希 2-氨基-3-氟苯藍(lán)氏賈第鞭毛蟲

粘孢白僵 DL-脯氨酰鹽鹽β-乳球蛋白

黃曲霉 [1,3-雙(2,4,6-三基)-2-咪唑烷亞基][(苯硫基)亞甲基](三環(huán)己基膦)二化釕酪蛋白

棒形青霉 N,N-雙叔丁氧羰基-N-烯血吸蟲

枯草芽孢桿 2-異基-4,5-二甲基-1H-咪唑藍(lán)氏賈第蟲

地衣芽胞桿 1-Boc-4-溴-1H-吡唑痢疾阿米巴

三線鐮孢 Boc-D-2,4-二苯包蟲病

爪哇根霉磺達(dá)肝癸鈉隱孢子蟲

巨大芽孢桿 A 7-溴-1，2，3，4-四氫喹啉鹽絲蟲

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