細(xì)胞膜橙紅色熒光探針(DiI)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9821

產(chǎn)品介紹:

長(zhǎng)鏈二烷基羰花青化合物，特別是Dil（分子量933.88），廣泛應(yīng)用于固定和非固定的組織與細(xì)胞中，進(jìn)行順行或逆行的神經(jīng)示蹤分析。

Dil 不會(huì)影響細(xì)胞的活力、生長(zhǎng)以及基本生理特性。Dil 標(biāo)記運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，可在培養(yǎng)基條件下持續(xù)跟蹤長(zhǎng)達(dá)四周，在體內(nèi)長(zhǎng)達(dá)一年。染料通過在質(zhì)膜中的緩慢橫向擴(kuò)散均勻標(biāo)記神經(jīng)元，0.2~0.6mm/每天/固定標(biāo)本，在活體組織里，可以達(dá)到6mm/每天。經(jīng)過醛固定的組織，Dil 的擴(kuò)增可以持續(xù)長(zhǎng)達(dá)1~2 年。一般情況下未標(biāo)記的染料不會(huì)向非標(biāo)記的細(xì)胞轉(zhuǎn)移，除非質(zhì)膜被破壞，比如切片部位。

儲(chǔ)存：-20℃，避光，有效期12個(gè)月。

中文名稱：細(xì)胞膜橙紅色熒光探針(DiI)

英文名稱：DiI

產(chǎn)品規(guī)格：10mg

貨號(hào)：FS-X9821

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

Mdm2p53結(jié)合蛋白同源物(MDM2)英文名：MDM2 磷化半胱蛋白9抗體包裝1g

M2-型激(PKM2)英文名：PKM2 磷化半胱蛋白9抗體包裝250mg

L-型電壓依賴性鈣離子通道α1D亞基(CACNα1D)英文名：CACNα1D 磷化β 連環(huán)蛋白抗體包裝5g

L-型電壓依賴鈣離子通道α1S亞基(CACNα1S)英文名：CACNα1S 磷化β 連環(huán)蛋白抗體包裝1g

L-型電壓依賴鈣離子通道α1F亞基(CACNα1F)英文名：CACNα1F 磷化β 連環(huán)蛋白抗體包裝5g

L-型電壓依賴鈣離子通道α1C亞基(CACNα1C)英文名：CACNα1C 磷化β 連環(huán)蛋白抗體包裝5g

Lin-28同源物A(LIN28A)英文名：LIN28A 造血干抗原CD133抗體包裝50mg

L1-細(xì)胞粘附分子(L1CAM)英文名：L1CAM 1號(hào)染色體開放閱讀框138抗體包裝100mg

Kruppel樣因子1(KLF1)英文名：KLF1 6號(hào)染色體開放閱讀框50抗體包裝1g

Klotho蛋白(KL)英文名：KL 1號(hào)染色體開放閱讀框151抗體包裝25ml

Klothoβ蛋白(KLβ)英文名：KLβ 腫瘤壞死因子受體超家族成員9抗體包裝5ml

Ki-67蛋白(Ki67P)英文名：Ki67P 復(fù)合前列腺特異性抗原單克抗體包裝100g

JunB原癌基因(JUNB)英文名：JUNB 組織蛋白z抗體包裝25g

Jagged1蛋白(JAG1)英文名：JAG1 2號(hào)染色體開放閱讀框84抗體包裝1g

IL2誘導(dǎo)T細(xì)胞激(ITK)英文名：ITK 磷化鈣/鈣調(diào)依賴蛋白激2α抗體包裝1g

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品乙型肝炎病核心抗體IgM試劑盒鹽甜菜堿;Betaine hydroc

雜色曲霉原變種Aspergillus│versicolor var. versicolor 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR乙型肝炎病核心抗體IgG試劑盒鹽吐根酚堿;Cephaeline hy

弓形蟲(GJS－4株)Toxoplasma│gondii 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品乙型肝炎病核心抗體試劑盒α-亞油;α-Linoleic aci
細(xì)胞膜橙紅色熒光探針(DiI)紅色紅曲 3-甲氧基-4-氧代-1-羧叔丁酯反狀腺原

平菇(江都156) 抗氧劑 702補(bǔ)體因子H相關(guān)蛋白1

Pseudomonas entomophila L48 DL-氨酰甘C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白3

產(chǎn)紫青霉 2-氨基-4-羥基吡啶鹽鹽14－3－3蛋白

植物乳桿酮基丁二二乙酯流行性乙型腦炎病IGM抗體

椿象紅球 2-氟-6-(2H-1,2,3-噻唑-2-基)尿糖

沙場(chǎng)鏈霉四乙基醋琥珀酰合成

糞腸球 2-氨基-噻唑-4-甲酰亞硝鹽

短密青霉 2-氨基-3,6-二氟甲酯周期依賴性激4

交鏈孢 Bz-rC亞磷酰單體乙肝兩對(duì)半

巨大芽孢桿 2-羥基-5-鹽鹽肌球蛋白輕鏈激

匯合海桿 4-溴-3,5-二三葉因子

釀酒酵母 2-氨基-4,7-二氫噻吩[2,3-C]吡喃-3-羧乙酯8-氧鳥

粉紅擲孢酵母 N-叔丁氧羰基吡咯-2-甲有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽

Marisediminicola 3-(N-Boc-氨甲基)OATP1B3

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