神經(jīng)元示蹤劑—核黃-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9807

中文名稱：神經(jīng)元示蹤劑—核黃

英文名稱：Nuclear Yellow(Hoechst S769121)

產(chǎn)品規(guī)格：10mg

貨號(hào)：FS-X9807

產(chǎn)品介紹:

分子量：651.01

外觀：淡黃色粉末

溶劑：水或者DMSO

光學(xué)特性：Excitation = 355 nm; Emission = 495 nm.

儲(chǔ)存：-20℃，避光，有效期兩年。

Hoechst 系列染料是一類可用于應(yīng)用于熒光顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)分析的標(biāo)記DNA 的熒光家族染料。因其可以標(biāo)記DNA，所以這類染料被廣泛的應(yīng)用于細(xì)胞核和線粒體的可視化定位。Hoechst33258 和Hoechst33342 作為類二苯甲亞胺的染料，是其中廣泛應(yīng)用的核酸染料。這兩種染料都可以被350nm 左右的紫外光激發(fā)，發(fā)射461nm 左右的藍(lán)紫色熒光。Hoechst 染料可以用于固定或者活細(xì)胞染色，也通常被用于另一種核酸染料的替代物，DAPI。他們之間重要的區(qū)別在于Hoechst33342 的乙基可以使其更具有親脂性，因此更易于穿過(guò)細(xì)胞膜。在一些應(yīng)用中，Hoechst33258 相比Hoechst33342 表現(xiàn)出較差的膜透性。這類染料也常被用于檢測(cè)樣本DNA 的含量，只需要設(shè)置一個(gè)熒光強(qiáng)度-DNA 含量之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線即可。

本產(chǎn)品是一種長(zhǎng)波的核黃染料，通用和退行性示蹤標(biāo)志染料真藍(lán)做神經(jīng)元的雙色標(biāo)記。在神經(jīng)元細(xì)胞中，核黃優(yōu)先染色細(xì)胞核為黃色熒光，而真藍(lán)作為一種紫外激發(fā)光激發(fā)的二價(jià)陽(yáng)離子染料可以染色細(xì)胞質(zhì)為藍(lán)色熒光。兩種染料在免疫組織化學(xué)應(yīng)用中的表現(xiàn)都非常穩(wěn)定，可以用于和DAB 染料的聯(lián)合應(yīng)用。當(dāng)Hoechst33258、Hoechst33342 和核黃通過(guò)軸突逆行運(yùn)輸?shù)侥讣?xì)胞體后，可能會(huì)遷出軸突和母細(xì)胞體，因此可以作為毗鄰神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞核的熒光染料。這種遷出現(xiàn)象在體內(nèi)和體外的研究中，當(dāng)您將切片保存于水性環(huán)境下，都有發(fā)現(xiàn)。使用1%示蹤劑時(shí)，活體內(nèi)的遷出現(xiàn)象可以通過(guò)限制動(dòng)物的生存時(shí)間而加以控制。體外的遷出現(xiàn)象可以通過(guò)材料組織的快速處理來(lái)避免。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1(FGFR1)英文名：FGFR1 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白157抗體包裝5g

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子7(FGF7)英文名：FGF7 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白90B抗體包裝10MG

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子3(FGF3)英文名：FGF3 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白144A抗體包裝25g

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子23(FGF23)英文名：FGF23 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白104抗體包裝5g

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子18(FGF18)英文名：FGF18 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體包裝1g

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子15(FGF15)英文名：FGF15 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白67抗體包裝25g

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子13(FGF13)英文名：FGF13 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白129抗體包裝5g

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子12(FGF12)英文名：FGF12 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白107抗體包裝1g

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子11(FGF11)英文名：FGF11 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白18抗體包裝5g

成纖維細(xì)胞激活蛋白α(FAPα)英文名：FAPα 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白56抗體包裝1g

沉默調(diào)節(jié)蛋白6(SIRT6)英文名：SIRT6 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白116抗體包裝5g

沉默調(diào)節(jié)蛋白1(SIRT1)英文名：SIRT1 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白117抗體包裝1g

超氧化物歧化1(SOD1)英文名：SOD1 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白127抗體包裝100g

腸型脂肪結(jié)合蛋白(FABP2)英文名：FABP2 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白138抗體包裝25g

叉頭框蛋白P3(FOXP3)英文名：FOXP3 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白144NL抗體包裝5g

立枯絲核菌Thanatephorus│cucumeris (A.B. Frank) Donk 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR游離狀腺試劑盒2-O-乙酰山椒子烯;

龐蒂亞克亞硫鹽桿菌Sulfitobacter│pontiacus 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品游離睪試劑盒柚皮-7-O-葡萄糖;Narin

米曲霉Aspergillus│oryzae 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR游離蛋白S試劑盒異飛薊賓;Isosilybin
神經(jīng)元示蹤劑—核黃白色姜成林氏 2,3-二CD19分子

矮棒曲霉 N'-叔丁氧羰基-L-鳥(niǎo)結(jié)核

大腸埃希氏桿曲洛斯坦GTP環(huán)化水解1

條紋雞樅異酯烯乙酯肝鈉

擬青霉非那吡啶鹽鹽五聚

泛屬 2,3-二氟苯丁膽固?；D(zhuǎn)移

擲抱酵母硫代酰乙酯霍亂

黑木耳(植5) 6-甲基-2-吡啶甲甲酯線粒體解偶聯(lián)蛋白2

釀酒酵母溴化六氨合鈷 (metals basis)抗連接IgG抗體

釀酒酵母 3-基-4-三氟抗Abeta IgG抗體

白色短波單胞 3-基-2,6-二-4-(三氟甲基)吡啶微管相關(guān)蛋白1A；1B輕鏈3B

挪威畢赤酵母 β-托品組蛋白脫乙?；?

華根霉 3-氨基-2-溴-6-甲氧基吡啶腺

黃曲霉鄰溴苯乙酯FAM19A4

香菇吡唑解草酯抗風(fēng)疹病IgG抗體

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