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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 羰化青DiI(神經(jīng)元示蹤劑)
貨號(hào) | FS-X9812 |
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培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
中文名稱:羰化青DiI(神經(jīng)元示蹤劑)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:10mg
貨號(hào):FS-X9812
產(chǎn)品介紹:
長(zhǎng)鏈二烷基羰花青化合物,特別是Dil(分子量933.88),廣泛應(yīng)用于固定和非固定的組織與細(xì)胞中,進(jìn)行順行或逆行的神經(jīng)示蹤分析。Dil 不會(huì)影響細(xì)胞的活力、生長(zhǎng)以及基本生理特性。Dil 標(biāo)記運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元,可在培養(yǎng)基條件下持續(xù)跟蹤長(zhǎng)達(dá)四周,在體內(nèi)長(zhǎng)達(dá)一年。染料通過(guò)在質(zhì)膜中的緩慢橫向擴(kuò)散均勻標(biāo)記神經(jīng)元,0.2~0.6mm/每天/固定標(biāo)本,在活體組織里,可以達(dá)到6mm/每天。經(jīng)過(guò)醛固定的組織,Dil 的擴(kuò)增可以持續(xù)長(zhǎng)達(dá)1~2年。一般情況下未標(biāo)記的染料不會(huì)向非標(biāo)記的細(xì)胞轉(zhuǎn)移,除非質(zhì)膜被破壞,比如切片部位 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
白介33(IL33)英文名:IL33 CD30抗體包裝1g
白介31(IL31)英文名:IL31 角蛋白19,17,14,42,10抗體包裝250mg
白介3(IL3)英文名:IL3 角蛋白10抗體包裝5g
白介2受體β(IL2Rβ)英文名:IL2Rβ 電壓依賴性鈣通道Cav1.1抗體包裝1g
白介2受體α(IL2Rα)英文名:IL2Rα 肌磷激2抗體包裝250mg
白介28A(IL28A)英文名:IL28A 煙堿型乙酰受體α7抗體包裝25g
白介27(IL27)英文名:IL27 離子通道調(diào)節(jié)蛋白1A抗體包裝5g
白介25(IL25)英文名:IL25 粘蛋白-1/上皮膜抗原抗體包裝100g
白介23(IL23)英文名:IL23 CWF19L1蛋白抗體包裝25g
白介22受體α2(IL2Rα2)英文名:IL2Rα2 心動(dòng)加速蛋白多肽抗體包裝1g
白介22(IL22)英文名:IL22 通道相互作用蛋白3抗體包裝5g
白介21(IL21)英文名:IL21 12號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框29抗體包裝10MG
白介20(IL20)英文名:IL20 12號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框49抗體包裝25g
白介2(IL2)英文名:IL2 12號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框50抗體包裝5g
白介1受體關(guān)聯(lián)激2(IRAK2)英文名:IRAK2 12號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框53抗體包裝1g
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR抑制β-B試劑盒原百部次堿 ;Protostemotin
小腸結(jié)腸炎耶爾森菌Yersinia│enterocolitica 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR,可用于培養(yǎng)抑制βA試劑盒原百部堿;protostemonine
亞鐵氧化硫桿狀菌Acidithiobacillus│ferrooxidans 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品抑制B試劑盒硬飛燕草堿 ; delsoline
羰化青DiI(神經(jīng)元示蹤劑)鼠強(qiáng)對(duì)照液(乙乙酯介質(zhì)) 2-(三氟甲基)異煙b型流感嗜血桿抗體
瓜果腐霉 5-三氟甲基煙抗髓過(guò)氧化抗體
粗糙艾美耳球蟲(chóng) 硒化銅(II)轉(zhuǎn)化蛋白R(shí)hoA
高盧蜜環(huán) Boc-L-4-基苯東南亞α-地中海貧血Zeta球蛋白鏈
玫瑰變紅鏈霉 六氟異BK病
云微所奇異球 4-(2,3-Dimethyl-5-sulfo-3H-indol-3-yl)benzoic acidBK病特異性IgG抗體
芽孢桿屬 N,N-二異基乙三氫氟鹽整合αVβ1
馬賽 1-溴-3--5-苯25羥基膽固7α-羥化
林地蘑菇 N-叔丁氧羰基-N'-芴甲氧羰基-D-2,3-二氨基27羥基膽固
黑曲霉 5--1H-吡咯并[3,2-C]吡啶整合αV
優(yōu)美氈被孔 N-芐氧羰基-去甲托品酮整合β1
米根霉 2-溴-3-甲甲酯囊尾蚴病抗體
大豆擬莖點(diǎn)霉 3-苯甲氧基-5-溴吡啶
乳桿屬 3-甲酰肼肽基精脫亞氨Ⅱ
強(qiáng)壯類芽胞桿 甘正酯.鹽鹽傷寒抗體
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
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