細胞骨架藍色熒光探針-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9814

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：200μL

貨號：FS-X9814

產(chǎn)品介紹:

本染料是F-肌動蛋白的高親和力探針，由蘑菇毒素制成，與藍色熒光染料偶聯(lián)。以納米摩爾濃度使用時，鬼筆毒素是方便的探針，可用于對固定和打孔的組織切片、細胞培養(yǎng)物或無細胞實驗體系中的F-肌動蛋白進行標記、鑒別和定量。

Ex/Em：350nm/450nm，比抗體染色更*。適合于固定和通透的樣本。

熒光標記的鬼筆環(huán)肽與肌動蛋白對于不同的物種，包括植物和動物具有幾乎相同的高結(jié)合屬性。鬼筆環(huán)肽結(jié)合具有高選擇性，而F-肌動蛋白紅色熒光。呈現(xiàn)出很少的非特異性染色。本產(chǎn)品可以用于熒光顯微鏡、微孔板、比色皿。

濃度：200U/mL儲存：-20℃，避光，有效期6個月。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

白介15(IL15)英文名：IL15 1號染色體開放閱讀框103抗體包裝100g

白介13受體α2(IL13Rα2)英文名：IL13Rα2 兒茶酚O基移位抗體包裝25g

白介13(IL13)英文名：IL13 補體C1qTNF9鏈多肽抗體包裝5g

白介12B(IL12B)英文名：IL12B 平滑肌鈣調(diào)蛋白CNN2抗體包裝1g

白介12A(IL12A)英文名：IL12A 心肌病相關蛋白2包裝5g

白介11受體α(IL11Rα)英文名：IL11Rα 5號染色體開放閱讀框34抗體包裝100g

白介11(IL11)英文名：IL11 E1A激活基因激蛋白1抗體包裝25g

白介10(IL10)英文名：IL10 2號染色體開放閱讀框42抗體包裝5g

八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4(OCT4)英文名：OCT4 豬瘟病抗體包裝1g

酰tRNA合成復合多功能相互作用蛋白1(AIMP1)英文名：AIMP1 3號染色體開放閱讀框54抗體包裝5g

基己糖Bβ(HEXβ)英文名：HEXβ 2號染色體開放閱讀框43抗體包裝5g

基己糖Aα(HEXα)英文名：HEXα 豬瘟病抗體包裝5g

基端前心鈉肽(NT-ProANP)英文名：NT-ProANP 中心體蛋白110抗體包裝1g

基端前腦鈉(NT-ProBNP)英文名：NT-ProBNP 纖維包裝5g

阿黑皮原(POMC)英文名：POMC 分裂周期蛋白14B抗體包裝10ml

假單胞菌Pseudomonas│testosteroni 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR,可用于培養(yǎng)異質(zhì)性胞核核糖核蛋白M試劑盒鹽葫蘆巴堿;Trigonelline

Staphylococcus│aureus 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>97%,標準品異質(zhì)性胞核核糖核蛋白L試劑盒鹽石蒜堿;Lycorine hydro

疣孢青霉Penicillium│verruculosum 質(zhì)量規(guī)格：>98%,進分,sigma E1383 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白L試劑盒雅姆皂元 ;yamogenin
細胞骨架藍色熒光探針銹赤蠟黃鏈霉 1-芐氧羰基-3-羥基氮雜環(huán)丁烷喋呤抗體

慢生根瘤 2,4-二溴吡啶-3-甲胃動蛋白2抗體

釀酒酵母 3,4-雙(二氟甲氧基)苯甲Ⅱ型膠原α1

泡盛曲霉 6-溴-7-氟喹啉無翅型MMTV整合位點家族成員1

馬沙門氏 1-Boc-2-T因子

白黃馬賽 1-二茂鐵基乙尿肌酐

黃曲霉 2--4-甲氧基苯青霉

芽孢桿 N,N-雙(4-磺丁基)-3-鏈霉

布魯塞爾德克酵母 2-基-4-氟甲酯慶大霉

食有機物深海芽孢桿 6--1,8-二氮雜萘-2(1H)-酮相關抗原11A

卡門柏青霉 3-氟-4-溴溴芐肝吸蟲

Methylibium 基二茂鐵全反鈷II型

釀酒酵母 H-89 肝吸蟲IgM抗體

毛栓孔 1-甲基-1H-吡唑-4-肝吸蟲IgG抗體

類芽孢桿屬 1-N-芐氧羰基哌-2-甲甲酯抗磷脂A2受體IgG抗體

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