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貨號 | FS-X9953 |
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中文名稱:Gomori銀氨溶液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100ml
貨號:FS-X9953
產(chǎn)品介紹:
用途: 網(wǎng)狀纖維染色,可區(qū)分膠原纖維 注意事項(xiàng): 見光易分解,使用前恢復(fù)至室溫,染色后網(wǎng)狀纖維呈黑色。 儲存條件:4℃,避光,3個月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
耐冷類諾卡氏菌鈣/鈣調(diào)依賴蛋白激2α抗體Human ERGIC1 兔子白介3(IL-3)免疫試劑盒
紅細(xì)菌屬周期蛋白結(jié)合蛋白抗體Human EPS15R 兔子白介2(IL-2)免疫試劑盒
球孢白僵菌分裂周期蛋白2抗體Human ERGIC2 兔子白介1可溶性受體I (IL-1sR Ⅰ)免疫試劑盒
酪丁梭菌DNA分裂周期調(diào)控蛋白45抗體Human ERBB3 兔子白介1β (IL-1β)免疫試劑盒
橄欖產(chǎn)色鏈霉菌染色體相關(guān)蛋白H抗體Human ERBB4(Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4) 兔子白介1α(IL-1α)免疫試劑盒
簡青霉中心體蛋白質(zhì)76抗體Human EPB41L2 兔子白介18(IL-18)免疫試劑盒
Streptococcus sanguinis中心體蛋白152抗體Human ERC1 兔子白介13(IL-13)免疫試劑盒
異常威克漢姆酵母酪蛋白激1γ2/casein kinase Iγ1抗體Human EPB41L3 兔子白介11(IL-11)免疫試劑盒
山東糖多孢菌唇裂和腭裂相關(guān)跨膜蛋白1抗體Human EPHA6 兔子白介10(IL-10)免疫試劑盒
水稻腸桿菌趨化樣因子超家族成員8抗體Human EPHA7 兔子白介1(IL-1)免疫試劑盒
擬康氏木霉趨化樣因子超家族成員1抗體Human EPHX2 兔子γ干擾(IFN-γ)免疫試劑盒
梭菌神經(jīng)蠟樣質(zhì)脂褐質(zhì)沉積病蛋白CLN6抗體Human EPHA8 兔子β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)免疫試劑盒
腦膜膿性金黃桿菌甘結(jié)合蛋白抗體Human EFNB1(Ephrin B1) 兔子β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白(β-Cat)免疫試劑盒
異常漢遜酵母異常變種多巴D1受體相互作用蛋白抗體Human EPN3 兔子β4整合(ITG β4/CD104)免疫試劑盒
鏈格孢 蘋果專化型Capicua蛋白抗體Human EPRS 兔子α干擾(IFN-α)免疫試劑盒
釀酒酵母碳酐6抗體Human EPS15R 兔子α2抗纖溶(α2-AP)免疫試劑盒
黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRSyndecan-1/CD138試劑盒麥冬皂C
門多薩假單胞菌Pseudomonas│mendocina 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRSWI/SNF相關(guān), 基質(zhì)關(guān)聯(lián),肌動蛋白依賴染色質(zhì)調(diào)控因子,亞家族c,成員1試劑盒麥冬皂A
糙皮側(cè)耳(平菇)Pleurotus│ostreatus 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRSTEAP家族成員4試劑盒馬兜鈴內(nèi)酰
Gomori銀氨溶液堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿 3-基芐基溴磷化磷肌3激
根瘤 (S)-(+)-1-氨基-2-磷化內(nèi)皮型一氧化氮合
蘇云金芽孢桿 2,6-二氟-3-甲氧基芐KCTD9蛋白
枯草芽孢桿 1,1,1-三(4-羥苯基)乙烷穩(wěn)定1
三葉草根瘤 4-乙氧基-3-氟苯2-甲氧雌二
紫孢側(cè)耳(美味側(cè)耳) L-卡內(nèi)腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白1
枯草芽孢桿 L-(-)-乳甲酯腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白2
pQE31 四甲基硫脲腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白3
毛殼 十八烷十八烷基酯腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8
小鼠小短桿 3,5-二氟-2-甲氧基苯保護(hù)D1
巴斯德畢赤酵母 2-苯基苯并咪唑-5-磺抗α-烯化IgG抗體
釀酒酵母 烷基二苯磷酯磷化磷脂肌3激
大腸埃希 吡啶-2-乙磷化內(nèi)皮型一氧化氮合
德爾布有孢酵母 L-賴l-門冬鹽胰多肽
乳桿屬 3-甲基吡唑-5-甲乙酯跨膜蛋白173
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