釕紅染色液-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10159

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：釕紅染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：10ml

貨號(hào)：FS-X10159

產(chǎn)品介紹:

用途：

在植物病蟲(chóng)害組織切品染色中，可將宿主植物組織中菌絲體和孢子染成紅色。

注意事項(xiàng)：

釕紅(Ruthenium Red)分子式為Ru3O2Cl6.14(NH3)，號(hào)為11103-72-3，分子量為786.35，外觀為紅色晶體，可用做電壓敏感的鈣離子通道抑制劑

儲(chǔ)存條件：室溫，避光，12個(gè)月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

產(chǎn)色鏈霉菌富含亮跨膜纖連蛋白1抗體Human ZNF571 雞腫瘤壞死因子β(TNF-β)免疫試劑盒

三葉草根瘤菌富含亮跨膜纖連蛋白2抗體Human ZNF346 雞腫瘤壞死因子α(TNF-α)免疫試劑盒

馬賽菌富含亮跨膜纖連蛋白3抗體Human ZNF34 雞脂肪甘油三酯脂(ATGL)免疫試劑盒

微扁沃利雅炭皮菌牛纖維蛋白原抗體Human ZNF446 雞脂多糖/內(nèi)(LPS)免疫試劑盒

異常漢遜酵母異常變種FAM172A蛋白抗體Human RBP1(Retinol-binding protein 1) 雞脂蛋白脂(LPL)免疫試劑盒

草木樨中華根瘤菌磷化粘著斑激抗體Human ZNF557 雞孕激/孕(PROG)免疫試劑盒

茶新菇磷化粘著斑激抗體Human ZNF35 雞游離脂肪(FFA)免疫試劑盒

乙假絲酵母磷化脆性組三聯(lián)體抗體Human ZNF593 雞抑制B(INH-B)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌磷化FRA-1蛋白抗體Human ZNF571 雞抑制A(INH-A)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌枯草亞種磷化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體Human ZNF460 雞乙酰羧化α(ACACA)免疫試劑盒

西蕃蓮莖基腐病磷化堿性成纖維生長(zhǎng)因子受體1抗體Human ZNF470 雞胰高血糖(GC)免疫試劑盒

多根硬皮馬勃磷化叉頭蛋白家族抗體Human ZNF48 雞胰島樣生長(zhǎng)因子2(IGF2)免疫試劑盒

炭疽芽胞桿菌磷化叉頭蛋白3A抗體Human ZNF486 雞胰島樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)免疫試劑盒

谷棒桿菌Ⅲ型磷化叉頭蛋白3A抗體Human ZNF483 雞胰島(INS)免疫試劑盒

果生鏈核盤菌磷化叉頭蛋白3A抗體Human ZNF488 雞一氧化氮(NO)免疫試劑盒

玉蜀黍平臍蠕孢*磷化叉頭蛋白家族1抗體Human ZNF394 雞延伸因子Tu,線粒體(TUFM)免疫試劑盒

鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.9%3-O-β-D-葡萄糖( 1→4)-[

茄鐮孢Fusarium│solani 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,>99.0%(GC)3-O-b-D-葡萄糖( 1→4)-[

: Cs資源名稱: 百日咳博德特氏菌質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品3-O-β-D-葡萄糖( 1→3)- a
釕紅染色液淡紫擬青霉 2-基-4,4-二乙氧基丁乙酯C3H木質(zhì)合成

病研所芽孢桿 2-甲基-5-硝基煙乙酯ACC氧化

冷湖黃桿 4-羥基嘧啶乙酰羧化還原

球孢白僵 2,4-二-5-嘧啶甲乙酯乙酰羧化還原

釀酒酵母咪唑并[1,5-A]吡啶-7-甲乙酯核二磷激

總狀共頭霉 2-氟芐肼谷蛋白

扭托甲基桿 1-甲基-2-吡咯乙甲酯谷氨酰

大球蓋菇 5-羥基-2-甲氧基吡啶水通道蛋白

土曲霉吉法酯水通道蛋白

齒孢青霉 2-苯氧烷磺酰苯堿性磷

鮑魚(yú)側(cè)耳甲基雙烯雙酮碳酐

冷海水黃桿 1-二甲氨基-2-甲基-3-戊酮1-氨基環(huán)烷1-羧合成

短密青霉 N-(2-吡啶基)乙1-氨基環(huán)烷-1-羧氧化

鞘氨單胞屬 4-甲基-5-咪唑甲乙酯α-乳白蛋白

錐形赤褶菇單丁基氧化錫β-乳白蛋白
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)