活細(xì)胞核染料吖啶橙-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X9815

產(chǎn)品介紹:

橙是一種熒光色素，其檢測激發(fā)濾光片波長488nm。阻斷濾光片波長515nm。它與細(xì)胞中DNA 和RNA 結(jié)合量存在差別，可發(fā)出不同顏色的熒光，與DNA 結(jié)合量少發(fā)綠色熒光，與RNA 結(jié)合量多發(fā)桔黃色或桔紅色熒光。該染料具有膜通透性，能透過細(xì)胞膜，使核DNA 和RNA 染色。

在熒光顯微鏡下觀察，橙可透過正常細(xì)胞膜，使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；而在凋亡細(xì)胞中，因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光，或黃綠色碎片顆粒；而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。橙AO 常與溴化乙啶EB 合用雙染，因EB 只染死細(xì)胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光，由此可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。

用于細(xì)胞核染色時(shí)，推薦的橙工作濃度為0.1%。一般孵育條件是室溫避光15 分鐘。由于不同細(xì)胞對橙的攝取能力不同，該法不一定適用所有細(xì)胞。

儲(chǔ)存：-20℃，避光，有效期12月。

中文名稱：活細(xì)胞核染料吖啶橙

英文名稱：Acridine Orange；AO

產(chǎn)品規(guī)格：25mg

貨號：FS-X9815

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

δ樣蛋白1同源物(δLK1)英文名：δLK1 1號染色體開放閱讀框177抗體包裝1g

γ-內(nèi)啡肽(γEP)英文名：γEP 1號染色體開放閱讀框183抗體包裝250mg

γ-谷酰轉(zhuǎn)移1(γGT1)英文名：γGT1 克侖特羅/瘦肉精抗體包裝25g

γ-基丁A受體α2(γABRα2)英文名：γABRα2 6號染色體開放閱讀框151抗體包裝5g

γ-基丁(γABA)英文名：γABA 15號染色體開放閱讀框52抗體包裝100mg

β-血小板球蛋白(βTG)英文名：βTG 2號染色體開放閱讀框89抗體包裝1g

β細(xì)胞(βTC)英文名：βTC BCL10結(jié)合蛋白和激活核轉(zhuǎn)錄因子抗體包裝5g

β-位淀粉樣前體蛋白裂解1(βACE1)英文名：βACE1 凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白15抗體包裝25g

β-內(nèi)啡肽(βEP)英文名：βEP 慢性淋巴白血病缺失基因6蛋白抗體包裝5g

β-骨膠原交聯(lián)(βCTx)英文名：βCTx 13號染色體開放閱讀框38抗體包裝25g

β2-微球蛋白(β2M)英文名：β2M 14號染色體開放閱讀框140抗體包裝5g

α-生育酚轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(TTPα)英文名：TTPα 陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)樣蛋白2抗體包裝1g

α-乳清蛋白(αLA)英文名：αLA 15號染色體開放閱讀框62抗體包裝5g

α-內(nèi)啡肽(αEP)英文名：αEP 15號染色體開放閱讀框41抗體包裝100g

α-骨膠原交聯(lián)(αCTx)英文名：αCTx 環(huán)核陽離子通道蛋白α2抗體包裝25g

蘇云金芽胞桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,可用于培養(yǎng)異質(zhì)性胞核核糖核蛋白K試劑盒異牡荊;Isovitexin with

暫無Pararhodobacter│aggregans 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品異質(zhì)性胞核核糖核蛋白I試劑盒右旋龍腦;Borneol

香菇Lentinula│edodes 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,可用于培養(yǎng)異質(zhì)性胞核核糖核蛋白H試劑盒油;cis-9-Octadecenoi
活細(xì)胞核染料吖啶橙氧化節(jié)桿 1-溴-4-正十二烷基苯C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白5

猴頭醋烏利司他蛋白激M2

馬克斯克魯維酵母 5-溴-2-芐氧基-6-磷酯Cε鏈

出芽短梗霉磷三異丁酯狂犬病抗體

聚生殼 2-氨基-3,5-二氟膜輔蛋白

球孢白僵 4-芐基嗎啉-2-甲α-乳白蛋白

釀酒酵母 2-(甲氧基)苯抗骨骼肌抗體

根瘤 3-甲酰氨基-3-苯基Ⅱ型膠原代謝產(chǎn)物C2C

松口蘑 6,6'-二溴-N,N'-(2-辛基十二烷基)-異靛藍(lán)小而密低密度脂蛋白膽固

斑玉蕈 2-溴-3-氨基-6-snap-tag蛋白

醬油曲霉 2-溴-3-氨基-4-血小板衍化生長因子A

釀酒酵母 3-氨基-4-溴-2-CXC趨化因子受體5

蝦苗殺蝦微桿 4-乙氧基-2,3-二氟苯甲單純皰疹病1IgG抗體

果生鏈核盤 Dowex? 50WX2-100離子交換樹脂單純皰疹病1IgM抗體

根瘤 4-溴甲基-2--頻那酯水痘-帶狀皰疹病IgG抗體

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