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| 貨號 | FS-X9955 |
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產(chǎn)品介紹:
用途： 網(wǎng)狀纖維染色，可區(qū)分膠原纖維 注意事項(xiàng)： 光易分解，使用前恢復(fù)至室溫，網(wǎng)狀纖維呈黑色 儲存條件：4℃，避光，3個月 |
中文名稱：Gordon-Sweets銀氨溶液
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：100ml
貨號：FS-X9955
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
暹羅盤孢冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白抗體Human ENTPD4 兔子Ⅲ型前膠原基末端肽(PⅢNP)免疫試劑盒
產(chǎn)朊假絲酵母連接相關(guān)蛋白1抗體Human ENOX2 兔子Ⅲ型前膠原基端肽(PⅢNT)免疫試劑盒
費(fèi)希爾曲霉連接相關(guān)蛋白2抗體Human ENOX1 兔子Ⅲ型前膠原(HPCⅢ)免疫試劑盒
成鏈需鹽桿菌 磷化周期依賴性激5抗體Human ENPP4 兔子Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)免疫試劑盒
pACYC184異戊烯半胱羧基轉(zhuǎn)移抗體Human ENPP5 兔子Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)免疫試劑盒
黃桿菌鳥核交換因子CLLD7抗體Human ELP4 兔子Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)免疫試劑盒
四川散斑殼趨化樣因子超家族成員4抗體Human EIF5A2(Eukaryotic translation initiation factor 5A-2) 兔子Ⅱ型肺泡表面抗原(KL-6)免疫試劑盒
繩索狀芽胞桿菌趨化樣因子超家族成員7抗體Human EIF5B 兔子Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)免疫試劑盒
膠孢趨化樣因子超家族成員5抗體Human EMB 兔子Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白64B抗體Human EIF6(Eukaryotic Translation Initiation Factor 6) 兔子Ⅰ型膠原N末端肽(NTX)免疫試劑盒
釀酒酵母組蛋白H3-K9甲基轉(zhuǎn)移抗體Human ELMOD1 兔子Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌趨化樣因子超家族成員6抗體Human ELMOD2 兔轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGFB3)免疫試劑盒
熱帶假絲酵母cornichon樣蛋白抗體Human EIF5A(Eukaryotic translation initiation factor 5A-1) 兔轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)免疫試劑盒
溜曲霉Ras激抑制因子連接增強(qiáng)蛋白1抗體Human EIF5 兔中性粒明膠相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)免疫試劑盒
棲藻海桿狀菌Ras激抑制因子連接增強(qiáng)蛋白2抗體Human ELOF1 兔脂蛋白α(Lp-α)免疫試劑盒
西蕃蓮莖基腐病Ras激抑制因子連接增強(qiáng)蛋白3抗體Human EMB 兔載脂蛋白E(Apo-E)免疫試劑盒
芽胞桿菌Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>50%,BSSpondin-2 毛萼結(jié)
百日咳博德特氏菌Bordetella│pertussis 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRSPARC相關(guān)模塊化鈣結(jié)合蛋白2試劑盒莫諾宗
郎伍德鏈霉菌Streptomyces│longwoodensis 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRSPARC相關(guān)模塊化鈣結(jié)合蛋白1試劑盒貓眼草黃
Gordon-Sweets銀氨溶液黑腐皮殼 磷苯基酯粘蛋白1抗體
長枝木霉 3′,4′-二苯乙酮脫脫嘧啶核內(nèi)切1抗體
褐離褶傘 丁己酯博卡病IgG抗體
地生鱗傘 4-正戊基博卡病IgM抗體
釀酒酵母 (S)-(-)-1-苯基乙酮羧化
雙孢蘑菇 磺乙磷A1
錐形赤褶菇2-2 2-氨基-3-甲基-5-氟吡啶絡(luò)激受體-1
蒂蓋姆頭珠霉 環(huán)己溴氫鹽抗腦血管內(nèi)皮抗體
豬丹絲 聚二環(huán)氧乙烷甲基肌酐
盤長孢狀盤孢 2,5-二氟苯磺酰煙曲霉IgG抗體
聚紅粉端孢霉 2-(2'-羥基-3',5'-二叔戊基苯基)苯并三唑鋅指蛋白20
淡紫褐鏈霉 5--3--2-羧肝
根瘤 1,2:5,6-雙鄰異亞基-alpha-D-異構(gòu)呋喃糖鋅指蛋白288抗體
根瘤 苯胍鹽鹽抗人組織谷酰轉(zhuǎn)移分泌型IGA抗體
*冬蟲夏草 2,2-二甲基-5-(2,5-二氧基)戊胰彈力蛋白
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