麗春紅酸性品紅染色液-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9957

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱(chēng)：麗春紅酸性品紅染色液

英文名稱(chēng)：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

貨號(hào)：FS-X9957

產(chǎn)品介紹:

用途：

麗春紅酸性品紅染色液是Masson三色染色的有效成分之一，主要用于肌纖維的染色，染色后呈紅色

儲(chǔ)存條件：室溫，避光，12個(gè)月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

殼菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白43抗體Human EIF4A3 兔血栓A2(TXA2)免疫試劑盒

熱帶假絲酵母卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白46抗體Human EIF4B 兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)免疫試劑盒

枇杷假尾孢褐斑病卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白63抗體Human EIF4E3 兔血紅氧合1(HMOX1)免疫試劑盒

香菇卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白54抗體Human EIF4E2 兔血管性血友病因子/瑞斯托霉輔因子(VWF)免疫試劑盒

毛簇木霉卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白61抗體Human EIF4EBP2 兔血管生成2(ANG-2)免疫試劑盒

解淀粉芽孢桿菌植物亞種卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體Human EIF4G1 兔血管內(nèi)皮粘附分子1(VCAM-1/CD106)免疫試劑盒

禽腺病神經(jīng)酰激CERK抗體Human EIF4G3 兔血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)免疫試劑盒

假交替單胞菌分裂周期樣激2抗體Human EIF3E 兔血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)免疫試劑盒

豬瘟病分裂周期樣激3抗體Human EIF4H 兔信號(hào)肽,CUB域,EGF樣1(SCUBE1)免疫試劑盒

擬青霉17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框49抗體Human EIF3G 兔心肌特異性肌鈣蛋白T(c)免疫試劑盒

蘇云金芽胞桿菌肯尼亞亞種17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框53抗體Human EIF3H 兔心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)免疫試劑盒

四川散斑殼17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框57抗體Human EIF3J 兔纖溶抑制因子(TAFI)免疫試劑盒

柱狀田頭菇17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框64抗體Human EIF3I 兔纖溶抗纖溶復(fù)合物(PAP)免疫試劑盒

耐冷冷桿菌17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框66抗體Human EIF3L 兔色b-245重鏈(CYBB)免疫試劑盒

栗疫菌17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框74抗體Human EIF3K 兔維甲受體應(yīng)答蛋白2(RARRES2)免疫試劑盒

梨葉殼小圓孢菌17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框75抗體Human EIF2C1 兔糖化血紅蛋白A1c(A1c)免疫試劑盒

百慕大公海橄欖菌Pelagibaca│bermudensis 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRSH2攜帶蛋白試劑盒馬鞭草

葡萄座腔菌Botryosphaeria│dothidea (Moug.) Ces. & De Not. 質(zhì)量規(guī)格：>99.0%,BRSeryl- tRNA合成，質(zhì)試劑盒牡荊油

大西洋假絲酵母Candida│atlantica 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRSalusin Beta試劑盒馬兜鈴C
麗春紅酸性品紅染色液梅花狀青霉 3--4-氨基DPPX-IgG抗體

黃硬皮馬勃 3-硝基-1,2,4-三唑IgLON家族蛋白5抗體

阿維鏈霉雙乙酰乙酰對(duì)苯二豬肉絳蟲(chóng)

枯草芽孢桿 2-叔丁基-5-抗神經(jīng)節(jié)脂抗體

絳紅產(chǎn)色小單胞 L-纈芐酯鹽鹽抗神經(jīng)節(jié)脂抗體

紅冬孢酵母屬甘芐酯鹽鹽抗神經(jīng)節(jié)脂抗體

白靈側(cè)耳 3-(1-萘氧基)-1,2-環(huán)氧烷抗神經(jīng)節(jié)脂抗體

Hyalodendriella betulae Crous 4-吡啶-2-甲甲酯抗神經(jīng)節(jié)脂抗體

貪噬十二烷基甲酯抗神經(jīng)節(jié)脂抗體

香菇 6-氨基-1-甲基離子通道輔助蛋白1

不吸水鏈霉 4-乙氧基-2,3-二氟-6-胞內(nèi)離子通道蛋白1

孟氏假單胞正丁基縮水甘油磷

枯草芽孢桿 N-甲基二烯基組蛋白脫乙酰基5

相思根瘤 2,3-二溴-6-吡啶甲氧基腎上腺

植物乳桿 4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜烷-2-基)-1H-吲唑可溶性髓系觸發(fā)受體-2
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)