Masson三色染色液-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9958

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

中文名稱：Masson三色染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：7×50ml|7×100ml

貨號：FS-X9958

產(chǎn)品介紹:

用途：

經(jīng)典膠原纖維染色，可區(qū)分膠原纖維和肌纖維。

注意事項：

染核后能更容易區(qū)分膠原纖維和肌纖維，本試劑盒采用經(jīng)典的Weigert蘇木素。其結(jié)果為：膠原纖維呈藍色，胞核呈藍褐色肌纖維、紅細胞等呈紅色。

儲存條件：室溫，避光，12個月

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

熱帶假絲酵母17號染色體開放閱讀框77抗體Human EIF2B4 兔腎(Renin)免疫試劑盒

節(jié)桿菌17號染色體開放閱讀框78抗體Human EIF1AX 兔腎上腺(EPI)免疫試劑盒

Pseudarthrobacter維甲調(diào)節(jié)核基質(zhì)相關(guān)蛋白抗體Human EIF3B 兔神經(jīng)型乙酰受體亞基α7(CHRNA7)免疫試劑盒

微桿菌17號染色體開放閱讀框42抗體Human EIF3C 兔神經(jīng)肽Y(NPY)免疫試劑盒

釀酒酵母17號染色體開放閱讀框97抗體Human EIF1AD 兔色上皮衍生因子(PEDF)免疫試劑盒

深藍鐮孢貓眼綜合征染色體候選基因1抗體Human EIF3D 兔乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)免疫試劑盒

樹生黃單胞菌貓眼綜合征染色體候選基因6抗體Human EIF1AY 兔溶菌(LZM)免疫試劑盒

海洋桿菌21號染色體開放閱讀框2抗體Human EIF1B 兔熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒

美登木糖霉菌9號染色體開放閱讀框86抗體Human EIF2A 兔熱休克蛋白40(HSP-40)免疫試劑盒

芽胞桿菌21號染色體開放閱讀框128抗體Human EIF2AK1 兔去甲腎上腺(NA)免疫試劑盒

釀酒酵母6號染色體開放閱讀框62抗體Human EIF2S1(Eukaryotic translation initiation factor 2 subunit 1) 兔前列腺F(PG-F)免疫試劑盒

高加索球孢鏈霉菌CCZ1蛋白抗體Human EIF2B1 兔葡萄糖-6-磷-1-脫氫(G6PD)免疫試劑盒

中間氣單胞菌腦蛋白5抗體Human EIF2S2 兔凝血原片段F1+2(F1+2)免疫試劑盒

運動節(jié)桿菌21號染色體開放閱讀框58抗體Human EIF2S3 兔凝血抗凝血復(fù)合物(TAT)免疫試劑盒

根霉屬20號染色體開放閱讀框43抗體Human EIF3B 兔凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX1)免疫試劑盒

大腸埃希氏桿菌9號染色體開放閱讀框43抗體Human EIF1AD 兔尿激型纖溶原激活物受體(PLAUR/uPAR)免疫試劑盒

頂孢頭孢霉Acremonium│strictum W. Gams 質(zhì)量規(guī)格：>50%,BRSalusin Alpha試劑盒沒食子辛酯

紡錘單頂孢Monacrosporium│fusiformis 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRSAA/LDL復(fù)合物沒食子酯

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：Al2O3>90%,BCS100鈣結(jié)合蛋白P試劑盒漏蘆甾
Masson三色染色液北成對桿 3-溴-5-磺酰*羧化骨鈣

小立碗蘚類芽孢桿 6-溴-4-氟-1H-吲唑唾液皮質(zhì)

枯草芽孢桿 3-吲唑-6-甲甲酯高密度脂蛋白載脂蛋白A1

間座殼 (2,2-二環(huán)基)苯高密度脂蛋白血清淀粉樣蛋白A

墨西哥劍五甲基高密度脂蛋白對氧磷-1

禾粘座孢霉（或禾漆斑） 3-N-叔丁氧羰基氨基環(huán)己酮雌馬

絨囊耙齒 2,3,5,6-四吡啶血管性血友病因子裂解

膠凍樣芽胞桿 5-吲唑羧乙酯IgA-Fc斷片受體

雜色曲霉 1H-吲唑-7-羧乙酯一氧化碳血紅蛋白

桔橙小單孢 6-溴-3-基吲唑過氧化4

枯草芽孢桿 6-溴-1H-吲唑-3-甲食欲肽

棕黑腐質(zhì)霉 1-Boc-4-甲脒低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白4抗體

墳?zāi)构?jié)桿 2-乙氧基吡啶-5-乙酮肥大生長因子

雞白痢沙門氏 4,4-雙(5-甲基-2-苯并唑基)二苯乙烯Ⅲ型前膠原肽

布雷鏈格孢 5-溴-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-B]吡啶自身調(diào)節(jié)因子
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)