即用型DAPI染色液-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9830

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：10ml|50ml

貨號(hào)：FS-X9830

產(chǎn)品介紹:

DAPI（4,6-Diamidino-2-phenylindole ，4,6-二氨基-2-苯基吲哚）是一種DNA 特異性染料，與DNA產(chǎn)生非嵌入式結(jié)合，發(fā)出藍(lán)色熒光。該染料對(duì)細(xì)胞膜有半通透性，可透過(guò)正常活細(xì)胞產(chǎn)生較弱的藍(lán)色熒光（細(xì)胞固定后熒光增強(qiáng)），而凋亡細(xì)胞的膜通透性增加，對(duì)其攝取能力增強(qiáng)，產(chǎn)生很強(qiáng)藍(lán)光染色。

正常細(xì)胞的核形態(tài)呈圓形，邊緣清晰，染色均勻，而凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核邊緣不規(guī)則，細(xì)胞核染色體濃集，著色較重，并伴有細(xì)胞核固縮，核小體碎片增加，因此從熒光強(qiáng)度及核形態(tài)均可鑒別出細(xì)胞發(fā)生凋亡的典型特征。

操作方法（本方法針對(duì)貼壁細(xì)胞，但不僅限于貼壁細(xì)胞）

1. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞爬片棄去培養(yǎng)基，10mM PBS，pH7.4，洗一次；

2. 再滴加入100μL 的DAPI 染液，室溫避光染色5-15 min；

3. 棄去染色液，PBS 漂洗一次，

4. 滴加甘油或Buffer A，熒光顯微鏡以340/380nm 紫外光激發(fā)，500×（40×12.5）（好是100×油鏡頭）觀察、拍照。

儲(chǔ)存：2-8℃，避光，有效期6個(gè)月。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

AV-951英文名： Adenosine磷化鈣調(diào)磷B亞基B1抗體包裝5g

BGJ398(NVP-BGJ398)英文名： Adiphenine HCl羊毛甾14α-去基化蛋白抗體包裝5g

Carmustine(進(jìn)分)英文名： Adiphenine HCl補(bǔ)體C5抗體包裝1g

CEP-18770英文名： Alarelin Acetate5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框24抗體包裝250mg

HSP990英文名： Alendronate Sodium5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框42抗體包裝250mg

MK4827 (Niraparib)英文名： Alendronate Sodium5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框49抗體包裝250mg

O-6-芐基鳥(niǎo)英文名： Allopurinol5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框35抗體包裝1g

Ruxolitinib(INCB018424) pho...英文名： Allopurinol中心體蛋白192抗體包裝25g

SB431542,SB-431542英文名： Allylestrenol中心體蛋白27抗體包裝5g

TAE684英文名： Allylestrenol中心體蛋白290抗體包裝100g

Tamoxifen Citrate英文名： Alprostadil,PGE1,中心體蛋白63抗體包裝25g

Tariquidar,XR-9576英文名： Altrenogest中心體蛋白70/p10結(jié)合蛋白抗體包裝5g

阿法替尼英文名： Altrenogest中心體蛋白72抗體包裝1ml

阿法替尼雙馬來(lái)鹽英文名： Amantadine HCl中心體蛋白95抗體包裝25g

阿西替尼英文名： Amantadine HCl中心體蛋白89抗體包裝1g

: AS2.606資源名稱: 橢圓釀酒酵母質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,三合物胰高血糖樣肽1試劑盒異綠原C;Isochlorogenic

豌豆根瘤菌Rhizobium│leguminosarum 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品,三合物胰高血糖試劑盒異綠原B;Isochlorogenic

拉曼小毛霉原變種Micromucor│ramarnianus 質(zhì)量規(guī)格：效價(jià)≥750IU/MG,BP,BR胰多肽試劑盒異綠原A;Isochlorogenic
即用型DAPI染色液楊奇青霉 1-苯基正癸烷血管生成樣蛋白8

沙諾氏芽孢桿 3-溴甲酯谷脫羧65抗體

幼角鐮孢 4-鄰苯二甲酰亞氨基環(huán)己酮谷脫羧65IgG抗體

黑色附球霉 3,5-二溴-4-硝基吡唑新型隱球抗原

大腸埃希薄荷酮, mixture of isomers血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子D

雅致枝霉 2-溴-3-氟三氟甲苯沙眼衣原體IgA抗體

谷棒桿 (S)-3-氨基四對(duì)甲苯磺鹽枸櫞

季也蒙邁耶氏酵母 2-氨基-2，4-二煙甲酯磷二酯9A

大孔 (R)-(+)-alpha-氨基-gamma-丁內(nèi)酯鹽鹽耐膽鹽

嗜麥芽寡養(yǎng)單胞普羅帕脒整合αMβ2

黃色糖多孢 N-芐基-雙鄰乙基氨基鹽鹽整合αVβ5

居真細(xì)屬洛韋微管相關(guān)蛋白輕鏈3II

少根根霉 3,5-二氟-4-甲氧基苯甲甲型肝炎抗原

纖維單胞帕韋三水合物腫瘤蛋白p53

金黃桿阿替美唑鹽鹽氧化低密度脂蛋白IgG抗體

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