鞭毛染色液(Cerares-Gill法)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X10162

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：2×50ml

貨號：FS-X10162

產(chǎn)品介紹:

用途：

又稱西薩-基爾染色法，主要適用于不易染色的細(xì)菌鞭毛、產(chǎn)生膠質(zhì)較多的植物病原細(xì)菌以及鞭毛很細(xì)且容易脫落的細(xì)菌。

注意事項(xiàng)：

細(xì)菌鞭毛是細(xì)菌的運(yùn)動器官，幽門螺桿菌能夠從強(qiáng)酸性的胃內(nèi)腔穿過胃上皮細(xì)胞上的黏液層達(dá)到胃上皮細(xì)胞的中性環(huán)境，這就是鞭毛運(yùn)動作用的很好例證。通過鞭毛染色，可以觀察到鞭毛形態(tài)、數(shù)量和鞭毛在菌體分布的位置，鞭毛數(shù)量和在菌體上的分布位置是鑒定細(xì)菌的重要依據(jù)之一

儲存條件：室溫，避光，12個月

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

香菇延伸突觸蛋白3抗體Human ZNF253 雞熱休克蛋白40(HSP-40)免疫試劑盒

鴨疫里氏桿菌原纖維蛋白2抗體Human ZNF24 雞熱休克蛋白27(HSP-27)免疫試劑盒

滑菇尤文肉瘤FLI1蛋白抗體Human ZNF251 雞熱休克蛋白20(HSP-20)免疫試劑盒

鏈霉菌巖藻糖轉(zhuǎn)移1抗體Human ZNF256 雞去甲腎上腺(NA)免疫試劑盒

土曲霉凋亡調(diào)節(jié)蛋白δ+γ抗體Human L1CAM(Neural cell adhesion molecule L1) 雞前列腺F2α(PGF2α)免疫試劑盒

球毛殼菌叉頭蛋白O1/O3/O4抗體Human ZMAT2 雞前列腺E2(PGE2)免疫試劑盒

嬰兒配方乳粉化物微管相關(guān)蛋白FAM82B抗體Human ZIC4 雞皮質(zhì)/腎上腺(CORT)免疫試劑盒

越南芽孢桿菌纖維蛋白原A鏈抗體Human ZNF134 雞免疫球蛋白M(IgM)免疫試劑盒

鼠李糖乳桿菌FAS凋亡抑制分子1抗體Human PCGF6(Polycomb group RING finger protein 6) 雞免疫球蛋白G(IgG)免疫試劑盒

魯氏不動桿菌FAS凋亡抑制分子2Human ZKSCAN3 雞免疫球蛋白E(IgE)免疫試劑盒

針葉樹散斑殼表皮表面抗原1抗體Human ZIM3 雞免疫球蛋白A(IgA)免疫試劑盒

固氮菌9抗體Human ZNF140 雞免疫核糖核(Irna)免疫試劑盒

粗皮馬勃10抗體Human ZIP4 雞馬立克氏病病(MDV)抗體(IgM)免疫試劑盒

釀酒酵母11輕鏈抗體Human ZNF143 雞馬立克氏病病(MDV)抗體(IgG)免疫試劑盒

紫紅曲霉12重鏈抗體Human ZIP7 雞卵轉(zhuǎn)鐵蛋白(OT)免疫試劑盒

蘇云金芽胞桿菌FIGNL1蛋白抗體Human ZKSCAN1 雞卵清白蛋白免疫試劑盒

肺炎克雷伯菌肺炎亞種Klebsiella│pneumoniae 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml，溶劑：齊墩果-3-O-β-D葡萄糖( 1→3

解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種Bacillus│amyloliquefaciens subsp. amyloliquefaciens 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml,基體:1.0 mol/L HNO3黃花敗醬甙C;牡丹草B

煙曲霉Aspergillus│fumigatus 質(zhì)量規(guī)格：100.0μg/g,基體: 0.5mol/L的HCl溶液五味子
鞭毛染色液(Cerares-Gill法)黃硬皮馬勃十三烷二二氫新喋呤縮

毛柄(金針菇) 2--5-三氟-3-甲二氫還原

狂犬病參考疫苗 2--5-三氟-4-甲二氫合成

巨型艾美耳球蟲 2--5-三氟甲基-4-吡啶DHN-P3焦磷

中國臺灣根霉 N-(2-乙基)吡咯烷脂肪氧化

黃赭色鏈霉阿替林性蛋白

鴨疫里氏桿 4-(吡啶-3-基)-4-黃瓜綠斑駁病

膠孢 3-異喹啉甲乙酯喹啉磷核糖基轉(zhuǎn)移

枯草芽孢桿 1,3,5-三(4-羧基苯基)苯性β葡萄糖

耐輻射薄層 3-氨基-5--2-羥基甲酯水楊羧基轉(zhuǎn)移

多根硬皮馬勃 4--1-甲基-1H-咪唑[4,5-C]吡啶α-1抗胰糜蛋白

鐮孢霉 2-氨基-5-羥基-4-甲氧基甲酯胰蛋白抑制因子

Chryseobacterium lathyri 2,6-二甲基5核

紅球 4-氨基-2,5-二肌半乳糖合成

高山被孢霉 3-羥基α-葡萄糖

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