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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 肌纖維ATPase染色液
貨號(hào) | FS-X10020 |
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產(chǎn)品介紹:
用途: 腺苷三磷酸酶染色,用于骨骼肌中區(qū)分兩種肌纖維 注意事項(xiàng): 主要由堿性前孵育液、酸性前孵育液、孵育液、硫化液等組成。用堿性前孵育液處理Ⅰ型肌(紅肌、慢纖維)淡染,Ⅱ型肌(白肌、快纖維)深染;用酸性前孵育液處理Ⅰ型肌(紅肌、慢纖維)深染,Ⅱ型肌(白肌、快纖維)淡染。 儲(chǔ)存條件:4℃,避光,6個(gè)月 |
中文名稱:肌纖維ATPase染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:4×50ml
貨號(hào):FS-X10020
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
谷棒桿菌Ⅲ型磷化絲切蛋白抗體Human FGL1(Fibrinogen Like Protein 1) 人泡狀過(guò)表達(dá)癌癥促生存蛋白1(VOPP1/ECOP/GASP)免疫試劑盒
中慢生華癸根瘤菌磷化周期檢測(cè)點(diǎn)激2抗體Human FGL2(Fibrinogen Like Protein 2) 人排序連接蛋白3(SNX3)免疫試劑盒
庫(kù)爾勒海洋桿菌磷化分裂周期蛋白25抗體Human FRS2(Fibroblast Growth Factor Receptor SubstRate 2) 人偶聯(lián)因子6(CF6)免疫試劑盒
香菇磷化分裂周期蛋白25抗體Human fPSA(Free Prostate Specific Antigen) 人牛小腸堿性磷(CIAP)免疫試劑盒
木糖葡糖醋桿菌后期促進(jìn)復(fù)合蛋白3抗體Human FSHR(Follicle Stimulating Hormone Receptor) 人牛奶過(guò)敏原特異性IgE抗體免疫試劑盒
植物乳桿菌磷化CRK抗體Human FGL1(Fibrinogen Like Protein 1) 人牛兒基焦磷合(GGPS1)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌鈣粘蛋白6抗體Human FGFR4(Fibroblast Growth Factor Receptor 4) 人XIIIB鏈(F13B)免疫試劑盒
黃曲霉鈣粘蛋白23抗體Human FGL2(Fibrinogen Like Protein 2) 人XIII A1(F13A1)免疫試劑盒
羅伊氏乳桿菌小腦變性相關(guān)蛋白2抗體Human FGβ(Fibrinogen Beta) 人VIII(FVⅢ)免疫試劑盒
銅綠假單胞菌分裂周期2相關(guān)蛋白激7抗體Human FGα(Fibrinogen Alpha) 人Ⅻ(FⅫ)免疫試劑盒
釀酒酵母A型產(chǎn)氣莢膜梭菌(魏氏梭菌)Human f-Hb(Free Haemoglobin) 人ⅩⅢ(FⅩⅢ)免疫試劑盒
白姬松茸磷化角蛋白18抗體Human FLNα(Filamin A, Alpha) 人Ⅷ相關(guān)抗原(Ⅷ-Ag)免疫試劑盒
橙鱗傘胞嘧啶脫抗體Human FGα(Fibrinogen Alpha) 人Ⅶ(FⅦ)免疫試劑盒
釀酒酵母C2GNT3蛋白抗體Human FGβ(Fibrinogen Beta) 人Ⅴ(FⅤ)免疫試劑盒
蟋蟀草平臍蠕孢磷化原癌基因c-Jun抗體Human FcγR3B(Fc Fragment of IgG Low Affinity IIIb Receptor) 人Ⅱ(FⅡ)免疫試劑盒
細(xì)鏈格孢磷化原癌基因c-Jun抗體Human POTE-E(POTE-E(POTE Ankyrin Domain Family Member E)) 人凝血原前體蛋白(PIVKA-II)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌枯草亞種Bacillus│subtilis subsp. subtilis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRBcl-2樣蛋白1試劑盒粗壯女貞N
輪枝菌Verticillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>85%,分子生物學(xué)級(jí)B7-H4 查斯馬寧
AS2.185資源名稱: 釀酒酵母 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRA組鏈球菌菌壁多糖抗體試劑盒川翠定
肌纖維ATPase染色液大麗花輪枝孢 3-(Boc-氨甲基)氮雜環(huán)丁烷鹽鹽性別決定區(qū)Y框蛋白1
布魯氏?。?/span>+)陽(yáng)性血清 1-[2-(trifluoromethoxy)phenyl]ethanol骨骼肌肌動(dòng)蛋白α1
孟氏假單胞 D-高苯乙酯鹽鹽心肌肌鈣蛋白T
香菇 β-1,3-葡聚糖α橫紋肌肌動(dòng)蛋白
莫氏克羅諾桿 Amberlyst® A21 大孔樹(shù)脂脊髓灰質(zhì)炎病抗體
醋化醋桿 聚D-230乙型流感嗜血桿抗體
戴爾根霉 果聚糖腦膜炎雙球抗體
紅霉鏈霉 微球核 來(lái)源于金黃色葡萄球(株ATCC #27735)囊泡單轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2
釀酒酵母 Brij® S2 聚氧乙烯硬脂酯(Brij 72)無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員11
土曲霉 Brij® S2 聚氧乙烯硬脂酯(Brij 72)多巴轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白
短桿狀馬賽 右旋鐵5-羥色受體4
香菇 醋丁纖維5-羥色受體1B
巴氏醋桿 醋丁纖維眼小畸形關(guān)聯(lián)轉(zhuǎn)錄因子
明膠樣鏈霉 醋丁纖維精脫亞
紫丁香蘑 醋丁纖維色氨酰tRNA合成
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