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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>科研細(xì)胞>>原代細(xì)胞>> T淋巴細(xì)胞
產(chǎn)地 | 國(guó)產(chǎn) | 加工定制 | 是 |
---|---|---|---|
適用領(lǐng)域 | 科研 | 貨號(hào) | FS-01X9874 |
產(chǎn)品屬于:
產(chǎn)品名稱(chēng):T淋巴細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格:1×106
貨號(hào):FS-01X9874
產(chǎn)品類(lèi)型:原代細(xì)胞
單位:T25/瓶
提供細(xì)胞鑒定:提供免疫熒光鑒定報(bào)告
保存培養(yǎng)溫度(℃):37
運(yùn)輸溫度(℃):常溫
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀(guān)察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。 3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性 通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。 4.研究?jī)?nèi)容便于觀(guān)察、檢測(cè)和記錄 采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項(xiàng):
1. 接收到細(xì)胞,肉眼觀(guān)察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。 2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的)。 3.嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。 4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。 6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。 7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。
雞熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA試劑盒英文名稱(chēng):Chicken Heat Shock Protein 60,HSP-60 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
雞17羥皮質(zhì)類(lèi)固(17-OHCS)ELISA試劑盒英文名稱(chēng):Hydroxycorticosteroids,17-OHCS ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
雞白介4(IL-4)ELISA試劑盒 英文名稱(chēng):Chicken Interleukin 4,IL-4 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
雞白介2(IL-2)ELISA試劑盒英文名稱(chēng):Chicken Interleukin 2,IL-2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
雞一氧化氮(NO)ELISA試劑盒英文名稱(chēng):Chicken nitric oxide,NO ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
雞單純皰疹病毒Ⅱ型抗體(HSVⅡ-Ab)ELISA試劑盒 英文名稱(chēng):Chicken Herpes simplexvirus Ⅱ antibody,HSVⅡ-Ab ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
雞補(bǔ)體3裂解產(chǎn)物(C3SP)ELISA試劑盒英文名稱(chēng):Chicken Complement 3 split product,C3SP ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
雞腎上腺髓質(zhì)(ADM)ELISA試劑盒 英文名稱(chēng):Chicken adrenomedullin,ADM ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
雞巨噬細(xì)胞替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)ELISA試劑盒英文名稱(chēng):Chicken Alternative macrophage activation-associated CC chemokine 1,AmAC-1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
雞免疫核糖核(Irna)ELISA試劑盒 英文名稱(chēng):Chicken Immune RNA,Irna ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
雞β內(nèi)酰(β-lactamase)ELISA試劑盒 英文名稱(chēng):Chicken β-lactamase ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
雞流行性乙型腦炎抗體IgG(JE IgG)ELISA試劑盒英文名稱(chēng):Chicken Japanese Encephalitis IgG,JE IgG ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
雞α葡萄糖(a-Glu)ELISA試劑盒英文名稱(chēng):Chicken α-Glucosidase,a-Glu ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
雞血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA試劑盒英文名稱(chēng):Chicken Platelet Factor 4,PF-4 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
雞腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(TRAIL-R3)ELISA試劑盒英文名稱(chēng):Chicken tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 3,TRAIL-R3 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
雞L苯解(PAL)ELISA試劑盒 英文名稱(chēng):Chicken L-Phenylalanine ammonla-lyase,PAL ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
雞煙酰腺二核磷(NADPH)ELISA試劑盒 英文名稱(chēng):Chicken nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
雞B因子(BF)ELISA試劑盒英文名稱(chēng):Chicken factor B,BF ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
T淋巴細(xì)胞PLK5 /蛋白激5抗體規(guī)格: 0.2ml
phospho-MST1R(Tyr1353) 磷化原癌基因c-Met相關(guān)酪抗體規(guī)格: 0.1ml
MAPK13/SAPK4/p38delta 絲裂原活化蛋白激13抗體規(guī)格: 0.2ml
Robo2 軸突導(dǎo)向受體蛋白2抗體規(guī)格: 0.1ml
SKAR DNA聚合δ相互作用蛋白3抗體規(guī)格: 0.2ml
SRPK2 /蛋白激SRPK2抗體規(guī)格: 0.2ml
TBRG4 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β調(diào)節(jié)蛋白4抗體規(guī)格: 0.2ml
TLK2 /蘇TLK2抗體規(guī)格: 0.2ml
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