線蟲活體染色液(多色藍法)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10164

產(chǎn)品介紹:

用途：

利用根據(jù)線蟲在固定時體內(nèi)各器官的氫離子濃度和生理狀態(tài)不同，可區(qū)分線蟲和植物組織，游離的線蟲經(jīng)過染色后內(nèi)部器官染成不同顏色，便于觀察識別，主要用于觀察游離線蟲的染色

注意事項：

主要由次甲藍、乙醇、蒸餾水等組成

儲存條件：室溫，避光，12個月

中文名稱：線蟲活體染色液(多色藍法)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：50ml|100ml

貨號：FS-X10164

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

球孢白僵菌成纖維生長因子受體1原癌基因伴侶蛋白抗體Human ZKSCAN1 雞抗凝血Ⅲ(AT-Ⅲ)抗體免疫試劑盒

QT6 鈣粘蛋白家族成員7抗體Human ZC3HC1 雞抗鏈球菌溶血O(ASO)抗體(IgM)免疫試劑盒

香菇Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白2/5抗體Human ZCCHC11 雞抗鏈球菌溶血O(ASO)抗體(IgG)免疫試劑盒

磚紅鐮刀菌細(xì)絲蛋白A抗體Human ZFP36L2 雞抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)免疫試劑盒

馬賽菌磷化細(xì)絲蛋白A抗體Human ZFP64 雞巨噬替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)免疫試劑盒

科羅拉多擬無枝菌磷化細(xì)絲蛋白A抗體Human ZNF703 雞窖蛋白Caveolin-1(CAV1)免疫試劑盒

粟酒裂殖酵母DNA損傷修復(fù)基因XRCC9抗體Human MCPIP(Monocyte Chemoattractant Protein-induced Protein 1) 雞降鈣(CT)免疫試劑盒

長根小奧德蘑鱗柄變種磷化細(xì)絲蛋白A抗體Human ZNF711 雞堿性成纖維生長因子(bFGF)免疫試劑盒

大腸埃希氏桿菌磷化磷神經(jīng)膜抗體Human ZNF597 雞甲狀腺(T4)免疫試劑盒

釀酒酵母磷化堿性成纖維生長因子受體1抗體Human ZNF71 雞甲狀旁腺激(PTH)免疫試劑盒

德爾布有孢酵母磷化磷神經(jīng)膜抗體Human ZNF486 雞低密度脂蛋白(VLDL)免疫試劑盒

釀酒酵母叉頭蛋白N1抗體Human ZNF600 雞激敏感性脂肪(HSL)免疫試劑盒

腐殖質(zhì)鏈霉菌磷化DNA損傷修復(fù)基因XRCC9抗體Human ZNF488 雞基質(zhì)金屬蛋白2(MMP-2)免疫試劑盒

絲衣霉菌Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白1抗體Human ZNF496 雞基質(zhì)金屬蛋白1(MMP-1)免疫試劑盒

美澳型核果褐腐病菌Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白8抗體Human ZFP36L1 雞肌紅蛋白(MYO/MB)免疫試劑盒

阿克蘇海洋桿菌Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白3B抗體Human TMPRSS4(Transmembrane protease serine 4) 雞肌動蛋白,質(zhì)1(ACTB)免疫試劑盒

馬腺疫鏈球菌獸疫亞種Streptococcus│equi subsp.zooepidemicus 質(zhì)量規(guī)格：1000µg/mL,基體：10%HCl11-羥基柳杉

黃綠蜜環(huán)菌Armillaria│mellea 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml,基體：0.1mol/LNaOH3β-乙酰氧基-7,25-甘遂二烯-24

: CMCC44102資源名稱: 大腸埃希氏菌(大腸桿菌) 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml林澤蘭內(nèi)酯C
線蟲活體染色液(多色藍法)小平菇（秀珍菇） 5--2-核糖體S6K蛋白激

枯草芽孢桿 (R)-(-)-1-甲氧基-2-蔗糖非酵解型蛋白激1

白地霉 2--5-羥基嘧啶去乙?；疭irtuin6

4-甲基-D-苯VE

偶發(fā)貪銅 8--4-二氫色原酮脂肪合成

類干酪乳桿對肉桂硬脂酰ACP脫氫

Mesorhizobium 5-氨基-3-溴苯甲Δ12脂肪脫氫

枯草芽孢桿 5-喹哪啶膜鐵轉(zhuǎn)運蛋白

加德那氏鏈霉苯并呋喃-2-羧分支變位

鏈霉 (S)-2-氨基-2-環(huán)基乙吡咯啉-5-羧還原

綠梭鏈孢 2,5-二硫脲3-磷甘油脫氫

束紅球 3-溴-[1,2,4]噻唑并[4,3-A]吡啶5-磷核糖激

墨汁鬼傘 4-苯基環(huán)己酮硫代葡萄糖

棗生梅奇酵母 2,4-二羥基-6-甲線粒體膜H+-ATPase

水生黃桿 3-氨基-6-溴吡-2-甲單脫氫抗壞血還原

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