線蟲活體染色液(碘法)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10166

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：線蟲活體染色液(碘法)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

貨號(hào)：FS-X10166

產(chǎn)品介紹:

用途：

主要用于觀察植物組織內(nèi)部的線蟲，特別是根內(nèi)線蟲材料。

注意事項(xiàng)：

主要由碘等組成。

儲(chǔ)存條件：室溫，避光，12個(gè)月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

大腸埃希氏桿菌卷曲蛋白6抗體Human ZC3H4 雞睪(T)免疫試劑盒

三線鐮刀菌卷曲蛋白8抗體Human ZDHHC9 雞甘油-3-磷脫氫(GAPDH)免疫試劑盒

北京擲孢酵母FSD1蛋白抗體Human ZDHHC7 雞甘肽(GAL)免疫試劑盒

ATCC 700425卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白10抗體Human ZBP1 雞鈣結(jié)合蛋白(CALB2)免疫試劑盒

哈茨木霉Prader-Willi綜合征相關(guān)蛋白抗體Human ZBTB11 雞分泌型免疫球蛋白A(SIgA)免疫試劑盒

釀酒酵母AKT相互作用蛋白蛋白抗體Human ZBTB25 雞肺炎支原體(MP)抗體(IgG)免疫試劑盒

發(fā)光假蜜環(huán)菌DNA解旋V抗體Human YPEL5 雞多巴(DA)免疫試劑盒

豇豆慢生根瘤菌遠(yuǎn)端上游元件結(jié)合蛋白3抗體Human LGMN(Legumain) 雞凋亡相關(guān)因子(FAS)免疫試劑盒

紫皮蘑巖藻糖變旋抗體Human YTHDC1 雞低密度脂蛋白(LDL)免疫試劑盒

樊氏鹽單胞菌X三體綜合征相關(guān)蛋白FUNDC1抗體Human ZBTB37 雞的牛血清白蛋白(BSA)免疫試劑盒

芽胞桿菌弗林蛋白抗體Human YTHDF1 雞膽囊收縮A受體(CCKAR)免疫試劑盒

小弧菌富含絲/精重復(fù)結(jié)構(gòu)蛋白抗體Human YTHDF2 雞單純皰疹?、蛐涂贵w(HSVⅡ-Ab)免疫試劑盒

矮棒曲霉巖藻糖基轉(zhuǎn)移6抗體Human ZBTB38 雞催乳(PRL/LTH)免疫試劑盒

擬青霉巖藻糖基轉(zhuǎn)移7抗體Human ZBTB40 雞促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)免疫試劑盒

橙黃硬皮馬勃眼睛和頭發(fā)顏色相關(guān)蛋白FUZ抗體Human ZBTB44 雞促卵泡(FSH)免疫試劑盒

短柄帚霉濾泡型轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1/II型慢性淋巴性白血病抗體Human YTHDF3 雞促甲狀腺(TSH)免疫試劑盒

鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml in 10% HCl金合歡;槐

曲霉Aspergillus│oryzae 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml,基體:1mol/L HNO3大黃-8-O-葡萄糖

: AS3.3390資源名稱: 淡紫犁頭霉質(zhì)量規(guī)格：100µg/ml,,基體:1%HNO3正丁基酞;丁基酞內(nèi)酯
線蟲活體染色液(碘法)農(nóng)研所芽孢桿 2-苯氧基吡啶25羥基維生D3

葡萄生擬莖點(diǎn)霉四-(4-)乙烯3,4二羥基

芽孢桿屬 2-氨基-3-甲氧基吡4-羥基壬烯

釀酒酵母 6-羥基-4-嘧啶5羥基乙

釀酒酵母己5羥色

枯草芽孢桿縮二乙5-羥色受體7

吉氏芽孢桿 1-己基吡啶四氟鹽6酮前列腺F1α

不動(dòng)桿 4-吡啶-2,6-二羧8羥基脫氧鳥

芽胞桿 4-乙氧基-2-氟苯8異前列腺

枯草芽孢桿斯氏亞種 2,5-雙(錫烷基)噻吩并[3,2-b]噻吩8-異前列腺F2α

脫葉鏈霉甘氨酰-L-天冬Ⅰ型膠原C端肽

新月彎孢 7-氮雜-3-甲Ⅰ型膠原N末端肽

巴斯德畢赤酵母 2-溴噻唑-5-甲Ⅰ型膠原α1鏈

漢遜德巴利酵母 5-溴-3,4-二Ⅰ型膠原吡啶交聯(lián)終肽

曲霉 2-氨基-4-甲基噻吩-3-甲Ⅱ型肺泡表面抗原
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)